Otsene RT-qPCR komplekt
Komplekti kirjeldus:
◮ Otsene RT-qPCR komplekt, mis kasutab Foregene poolt välja töötatud Foreasy pöördtranskriptaasi ja Foreasy HS Taq DNA polümeraasi koos ainulaadse reaktsioonipuhvriga, muudab selle komplekti tugeva vastupidavuse ja ühilduvusega ning see võib otseselt testida reaktsiooni, kasutades mallina Foregene Lysis süsteemi.Seda komplekti saab kasutada COVID-19 nukleiinhapete tuvastamise komplekti ja muude patogeensete bakterite nukleiinhapete tuvastamise komplekti väljatöötamiseks.
Kirjeldus
Otsene RT-qPCR komplekt sisaldab eraldi pakitud RT-qPCR puhvrit ja kõrge efektiivsusega ensüümisegu (Taq, M-MLV, RI), muutes selle mugavaks taustakomplektide ja -süsteemide loomiseksreguleerimine ， lihtsa kontrolliga.
Tehnilised andmed
500T, 50000T
Komplekti komponendid
| Komplekti sisu (20 μl reaktsioonisüsteem) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Otsene ensüümide segu | 500 μL×1 | 50 ml×1 |
| 2 × otsene RT-qPCR puhver | 1 ml×5 | 500 ml×1 |
| Juhend | 1 | 1 |
Tööetapid
Enne reaktiivi valmistamist tuleb kõik komplektis olevad reaktiivid toatemperatuuril üles sulatada ja õrnalt segada.
A: Valmistage ette of malli ja reaktiiv
1. Valmistage ette valmistatud RNA matriits (RNA matriitsi ekstraheerimiseks ja puhastamiseks on soovitatav kasutada Foregene Total RNA Isolation Kit sarja komplekti) või krakkimisprodukti proovi (soovitatav on kasutada Foregene Lysis süsteemi), spetsiifilised praimerid (10 μM) ja muud asjakohased kulumaterjalid, instrument.
2. Pange 2× Direct RT-qPCR puhver, RNaasivaba ddH2O ja 20× ROX-i võrdlusvärv (kui see on's vaja) kasti jääga, pannes need loomulikult sulama ja segama õrnalt.
B: Valmistage ette of RT-qPCR süsteem
Tabel 1 : Valmistage ette of RT-qPCR ssüsteem
| Komponent | Helitugevus | Lõplik kontsentratsioon |
| 2 × otsene RT-qPCR puhver | 10 μL | 1× |
| Otsene ensüümide segu | 1μL | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Pöördpraimer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sond (4 μM) | 1μL | 200 nM |
| Mall (RNA või lüsaat) | X μL | |
| 20×ROX võrdlusvärv | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Kogumaht | 20μL |
C: Määra a RT-qPCR reaktsioon programm
Tabel 2 : RT-qPCR reageeridaon programm seadistus (jaoks näide: kaks-samm meetod)
| Samm | Temperatuur | Aeg | Tsüklid | Sisu | |
| 1 | 50℃ | 15 min | 1* | 1 | Pöördtranskriptsioon |
| 2 | 95℃ | 1 min | 1 | Eeldenatureerimine | |
| 3 | 95℃ | 10 sek | 40-45 | Denatureerimine | |
| 60℃ | 30 sekundit 2* | Anneal/Extension | |||
Ladustamine ja säilivusaeg
-Komplekti tuleks hoida temperatuuril -20± 5℃.Kehtivusaeg on 12 kuud.
- Vältige korduvaid külmutamise-sulatamise tsükleid (<5 tsüklit).
