Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation Purification Kits from cell
Komplekti kirjeldus:
Väga puhastatud ja kvaliteetset kogu-RNA-d saab erinevatest kultiveeritud rakkudest 11 minutiga.
RNaasivaba
Töötatakse toatemperatuuril (15-25 ℃)
DNA-puhastuskolonniga
Kõrge RNA saagis
Kiire: Lõpetage ekstraheerimine 11 minutiga
Ohutus: puudub Orgaaniline kemikaal
Kirjeldus
See komplekt kasutab Foregene välja töötatud tsentrifuugimiskolonni ja valemit, mis suudab tõhusalt ekstraheerida kõrge puhtusastmega ja kvaliteetset kogu-RNA-d rakkudest, mida on kasvatatud 96-, 24-, 12- ja 6-augulistel plaatidel.
Komplekt pakub tõhusat DNA-puhastuskolonni, mis suudab kergesti eraldada supernatandi ja rakulüsaadi, siduda ja eemaldada genoomse DNA.Toiming on lihtne ja aega säästev.
TAinult RNA-d sisaldav kolonn suudab tõhusalt siduda RNA-d ainulaadse valemiga.Samaaegselt saab töödelda suurt hulka proove.
Komplekti komponendid
| Komplekti koostis | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Puhver cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Puhver cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Puhver RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Puhver RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNaasivaba ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Ainult RNA-d sisaldav veerg | 50 | 200 |
| DNA-puhastuskolonn | 50 | 200 |
| Juhend | 1 | 1 |
*Palun kandke töö ajal kindaid ja rakendage kaitsemeetmeid, kuna puhver cRL1 ja puhver RW1 sisaldavad ärritavaid kaotroopseid sooli.
Omadused ja eelised
■ Kogu protsess toimub toatemperatuuril (15-25 ℃), ilma jäävanni ja madala temperatuuriga tsentrifuugimiseta.
■ Kogu komplekt on RNaasivaba, ei pea muretsema RNA lagunemise pärast.
■ DNA-puhastuskolonn seob spetsiifiliselt DNA-d, nii et komplekt saab eemaldada genoomse DNA saastumise ilma täiendavat DNaasi lisamata.
■ Kõrge RNA saagis: ainult RNA-d sisaldav kolonn ja ainulaadne valem võivad RNA-d tõhusalt puhastada.
■ Kiire kiirus: lihtne kasutada ja saab valmis 11 minutiga.
■ Ohutus: orgaanilist reaktiivi pole vaja.
■ Kõrge kvaliteet: puhastatud RNA on kõrge puhtusastmega, valgu- ja muude lisanditeta ning sobib erinevatele järgnevatele katsetele.
Komplekti rakendus
See sobib kogu RNA ekstraheerimiseks ja puhastamiseks kultiveeritud rakkudest 96, 24, 12 ja 6 süvendiga plaatidel.
Töövoog
Diagramm
Cell Total RNA Isolation Kit'i agaroosigeelpatarei diagramm käsitles ülaltoodud erinevat arvu rakke, 20 μl mahuelueerimine, 2 μl puhastatud kogu RNA 1%.
Ladustamine ja säilivusaeg
Komplekti saab hoida 12 kuud toatemperatuuril (15–25 ℃) või 2–8 ℃ kauem (24 kuud).
Puhvrit cRL1 saab säilitada temperatuuril 4 ℃ 1 kuu pärast 2-hüdroksü-1-etaantiooli (valikuline) lisamist.
RNA-d ei ekstraheerita või RNA saagis on madal
Taastumise efektiivsust mõjutavad sageli mitmesugused tegurid, näiteks: koeproovi RNA sisaldus, töömeetod, elueerimismaht jne.
1. Töötamise ajal viidi läbi jäävannis või krüogeenne (4 °C) tsentrifuugimine.
Soovitus: Töötage kogu protsessi vältel toatemperatuuril (15-25 °C), ärge jäävannis ega tsentrifuugige madalal temperatuuril.
2. Proovide ebaõige säilitamine või liiga pikk säilitusaeg.
Soovitus: hoida proove temperatuuril -80 °C või külmutada vedelas lämmastikus ja vältida korduvat külmutamist-sulatamist;proovige RNA ekstraheerimiseks kasutada värskeid kudesid või kultiveeritud rakke.
3. Ebapiisav proovi lüüs.
Soovitus: koe homogeniseerimisel veenduge, et kude oleks piisavalt homogeniseeritud ja et koerakud oleksid piisavalt lõhenenud, et selgitada RNA vabanemist.
4. Eluenti pole õigesti lisatud.
Soovitus: veenduge, et RNaasivaba ddH2Puhastuskolonni membraani keskele lisatakse tilkhaaval O.
5. Puhvrisse RL2 või puhvrisse RW2 ei lisatud õiget kogust absoluutset etanooli.
Soovitus: järgige juhiseid, lisage puhvrisse RL2 ja puhvrisse RW2 õige kogus absoluutset etanooli ning segage enne komplekti kasutamist korralikult läbi.
6. Koeproovi annus ei ole sobiv.
Soovitus: kasutage 10–20 mg kude või (1–5) × 106rakke 500 μl puhvri RL1 kohta, kuna koe liigne kasutamine võib vähendada RNA ekstraheerimist.
7. Vale elueerimismaht või mittetäielik elueerimine.
Soovitus: Puhastuskolonni elueerimismaht on 50-200 μl;kui elueerimisefekt ei ole rahuldav, on soovitatav pikendada toatemperatuuril asetamise aega pärast eelsoojendatud RNaasivaba ddH lisamist2O, nt 5-10 min.
8. Puhastuskolonnis on pärast puhvri RW2 pesemist etanoolijääk.
Soovitus: Kui pärast puhvri RW2 pesemist, tühja katsuti tsentrifuugimist 1 minuti jooksul on etanoolijääke, võib tühja katseklaasi tsentrifuugimise aega pikendada 2 minutini või asetada puhastuskolonni 5 minutiks toatemperatuurile, et jääk-etanooli adekvaatselt eemaldada.
Puhastatud RNA laguneb
Puhastatud RNA kvaliteet on seotud selliste teguritega nagu proovi säilivus, RNaasi saastumine ja manipuleerimine jne.
1. Koeproove ei hoita õigel ajal.
Soovitus: Kui koeproove või rakke ei kasutata õigeaegselt pärast kogumist, külmutada kohe -80 °C või vedela lämmastiku juures.RNA eraldamiseks kasutage võimalusel äsja võetud koe- või rakuproovi.
2. Koeproovide korduv külmutamine-sulatamine.
Soovitus: koeproovide säilitamisel on parem lõigata need säilitamiseks väikesteks tükkideks ja nende kasutamisel eemaldada üks tükk, et vältida proovi korduvat külmutamist-sulatamist ja RNA lagunemist.
3. RNaasi sisestatakse või ei kanta operatsiooni ajal ühekordseid kindaid, maske vms.
Soovitus: RNA ekstraheerimise katseid on kõige parem teha eraldi RNA manipuleerimisruumides ja laud puhastatakse enne katset.
Katse ajal kandke ühekordselt kasutatavaid kindaid ja maske, et minimeerida RNaasi sissetoomisest põhjustatud RNA lagunemist.
4. Reaktiivid on kasutamise ajal saastunud RNaasiga.
Soovitus: Asendage seotud katsete jaoks uue loomade kogu RNA isolatsioonikomplektiga.
5. RNA manipuleerimisel kasutatavad tsentrifuugitorud, otsikud jne on saastunud RNaasiga.
Soovitus: veenduge, et RNA ekstraheerimiseks kasutatavad tsentrifuugitorud, otsikud, pipetid jne on kõik RNaasivabad.
Puhastatud saadud RNA mõjutab allavoolu katseid
Puhastuskolonnis puhastatud RNA, kui soolaioonid, valgusisaldus on liiga suur, mõjutab allavoolu katset, näiteks: pöördtranskriptsioon, Northern Blot et al.
1. Elueeritud RNA-s on soolaioonide jääke.
Soovitus: veenduge, et puhvrile RW2 on lisatud õige kogus etanooli, ja tehke 2 puhastuskolonni pesu tööks näidatud tsentrifugaalkiirusel;soolaioonide jääkide korral jätke puhastuskolonn 5 minutiks toatemperatuuril puhvrisse RW2 ja tsentrifuugige, et maksimeerida soolasaaste eemaldamist.
2. Etanooli jääk elueeritud RNA-s.
Soovitus: veenduge, et pärast puhvri RW2 pesemist teostage tühja katsuti tsentrifuugimine tööks näidatud tsentrifuugimiskiirusel, suurendage tühja katsuti tsentrifuugimise aega 2 minutini, kui etanoolijääke on veel, või jätke see 5 meetriks toatemperatuurile.
