Otsene RT-qPCR komplekt II
Komplekti kirjeldus:
◮Otsene RT-qPCR komplekt, mis kasutab Foregene poolt välja töötatud Foreasy pöördtranskriptaasi ja Foreasy HS Taq DNA polümeraasi koos ainulaadse reaktsioonipuhvriga, muudab selle komplekti tugeva vastupidavuse ja ühilduvusega ning see võib otseselt testida reaktsiooni, kasutades mallina Foregene Lysis süsteemi.Seda komplekti saab kasutada COVID-19 nukleiinhapete tuvastamise komplekti ja muude patogeensete bakterite nukleiinhapete tuvastamise komplekti väljatöötamiseks.
Kirjeldus
Otsene RT-qPCR komplekt sisaldab eraldi pakitud RT-qPCR puhvrit, väga tõhusat Foreasy HS Taq DNA polümeraasija Foreasy pöördtranskriptaas (MMLV),muudab selle mugavaks taustakomplektide loomiseks ja süsteemi reguleerimiseks lihtsa kontrolliga.
Otsene RT-qPCR komplekt, mis kasutab Foregene poolt välja töötatud Foreasy pöördtranskriptaasi ja Foreasy HS Taq DNA polümeraasi koos ainulaadse reaktsioonipuhvriga, muudab selle komplekti tugeva vastupidavuse ja ühilduvusega ning see võib otseselt testida reaktsiooni, kasutades mallina Foregene Lysis süsteemi.Seda komplekti saab kasutada COVID-19 nukleiinhapete tuvastamise komplekti ja muude patogeensete bakterite nukleiinhapete tuvastamise komplekti väljatöötamiseks.
See komplekt võib olla otse IVD-toote komponent, mida kasutatakse lihtsalt ja kiiresti.See vajab ainult lihtsat kontrollimist, ilma uuesti arendamata.
Tehnilised andmed
500T, 50000T
Komplekti komponendid
| Komplekti sisu (20 μl reaktsioonisüsteem) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Foreasy Reverse transkriptaas (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA polümeraas (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2 × otsene RT-qPCRPuhver | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Juhend | 1 | 1 |
Tööetapid
V: Valmistage ette mall ja reaktiiv
1. Valmistage ette valmistatud RNA matriits (RNA matriitsi ekstraheerimiseks ja puhastamiseks on soovitatav kasutada Foregene Total RNA Isolation Kit sarja komplekti) või krakkimisprodukti proovi (soovitatav on kasutada Foregene Lysis süsteemi), spetsiifilised praimerid (10 μM) ja muud asjakohased kulumaterjalid, instrument.
2. Pange 2 × Direct RT-qPCR puhver, RNaasivaba ddH2O ja 20 × ROX-i võrdlusvärv (kui see on vajalik) jääga karpi, pannes need loomulikult sulama ja segage õrnalt.
B: RT-qPCR süsteemi ettevalmistamine
Hankige pool reaktsioonisüsteemi reaktsioonipuhvri mahust (näiteks kui süsteemi maht on 20 μL, peab see saama 10 μL 2× Direct RT-qPCR puhvrit). Sestvastav kogus ensüümi, soovitame sedaM-MLV: 10-30 U/20 μL reaktsioonisüsteem,TaqDNA polümeraas:1-2 U/20 μL reaktsioonisüsteemsee on meie soovitus, peaksite seda testima ja kohandama), lisage RNA matriit, spetsiifilised praimerid ja sondid ning lisage RNaasivaba ddH2O kuni 20 μL.RT-qPCR reaktsioonisüsteemi spetsiifilisele valmistamisele võib viidata järgmises tabelis 1.
Tabel 1: RT-qPCR süsteemi ettevalmistamine
| Komponent | Helitugevus | Lõplik kontsentratsioon |
| 2 × otsene RT-qPCR puhver | 10 μL | 1× |
| Foreasy pöördtranskriptaas (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA polümeraas | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Pöördpraimer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sond (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Mall (RNA või lüsaat) | X μL | |
| 20× ROX-i võrdlusvärv | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Kogumaht | 20 μL |
Märkus. Forward Praimer ja Reverse Praimer on sihtgeeni spetsiifilised praimerid.qPCR süsteemi saab kohandada vastavalt praktilistele eksperimentaalsetele ja PCR mudelitele.Enamiku praimerite lõppkontsentratsiooniks soovitame 400 nM.Palun reguleerige konkreetsete praimerite ja sondide mahtu vastavalt ettevalmistatud kontsentratsioonile ja soovitatud lõppkontsentratsioonile.
1*: valige ROX-i võrdlusvärvi sobiv lõppkontsentratsioon vastavalt erinevatele kvantitatiivsetele PCR-seadmetele.Tavaliste kvantitatiivsete PCR-seadmete optimaalne ROX-i võrdlusvärvi kontsentratsioon on näidatud järgmises tabelis:
| Kvantitatiivsed PCR-instrumendid | ROX-i võrdlusvärvi lõppkontsentratsioon |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,jne. | 1 × (näiteks lisage 1 μl 20 × ROX võrdlusvärvi 20 μL reaktsioonisüsteemi) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P ja Mx4000 jne. | 0,5 × (näiteks lisage 0,5 μl 20 × ROX võrdlusvärvi 20 μL reaktsioonisüsteemi) |
| Roche PCR instrument, Bio-Rad PCR instrument, Eppendorfi kvantitatiivne PCR instrument jne. | Ilma ROX-i võrdlusvärvita |
Ladustamine ja säilivusaeg
Komplekti tuleb hoida temperatuuril -20 ± 5 ℃.Seda tuleks kohe hoida -20 ℃ termostaadiga külmikus.Kõlblikkusaeg on 2 aastat, kui seda hoitakse sobivas seisukorras.
