Loomade kogu RNA eraldamise komplekt RNA kogu ekstraheerimise ja puhastamise komplektid loomade kudede ja rakkude jaoks
Komplekti kirjeldus:
Eraldage kiiresti ja tõhusalt kõrge puhtusastmega ja kvaliteetset kogu-RNA-d erinevatest loomsetest kudedest.
Pole vaja muretseda RNA lagunemise pärast.Kogu süsteem on RNaasi-vaba
Eemaldage DNA tõhusalt DNA-puhastuskolonni abil
Eemaldage DNA ilma DNaasi lisamata
Lihtne – kõik toimingud tehakse toatemperatuuril
Kiire – toimingu saab lõpetada 30 minutiga
Ohutu – orgaanilist reaktiivi ei kasutata
Kõrge puhtusastmega – OD260/280≈1,8-2,1
Komplektide kirjeldused
50 ettevalmistust, 200 ettevalmistust
See komplekt kasutabspin kolonn ja valemmeie ettevõtte poolt välja töötatud, mis suudab suure efektiivsusega eraldada kõrge puhtusastmega ja kvaliteetset kogu-RNA-d erinevatest loomsetest kudedest. See tagab tõhusa DNA-puhastuskolonni, mis suudab hõlpsasti eraldada ja adsorbeerida genoomset DNA-d supernatandist ja koelüsaadist, lihtne ja ajasäästlik;Ainult RNA-d sisaldav kolonn suudab tõhusalt RNA-d siduda ja seda saab töödelda üheaegselt ainulaadse valemiga. Palju proove.
Kogu süsteem on RNaasivaba, nii et ekstraheeritud RNA ei lagune;Puhver RW1, puhver RW2 puhverpesusüsteem, et saadud RNA oleks vaba valkude, DNA, ioonide ja orgaaniliste ühendite reostusest.
Komplekti komponendid
| Animal Total RNA isolation Kit | ||
| Komplekti komponendid | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Puhver RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Puhver RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Puhver RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Puhver RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNaasivaba ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Ainult RNA-d sisaldav veerg | 50 | 200 |
| DNA-puhastuskolonn | 50 | 200 |
| Kasutusjuhend | 1 tükk | 1 tükk |
Tooteteave
| Vorming | Pöörlemissammas | Puhastuskomponent | Võõrkolonn, reaktiiv |
| Flux | 1-24 näidist | Aeg ühe ettevalmistuse kohta | ~30 min (24 näidist) |
| Tsentrifuugi | Laua tsentrifuug | Pürolüüsi eraldamine | Tsentrifugaalne eraldamine |
| Näidis | Loomne kude;kamber | Proovide kogus | Kude: 10-20 mg;Lahter: (1–5) × 106 |
| Elueerimise maht | 50-200 μL | Maksimaalne laadimismaht | 850 μL |
Omadused ja eelised
■ Pole vaja muretseda RNA lagunemise pärast;kogu süsteem on RNaasivaba
■ Eemaldage tõhusalt DNA-d kasutades DNA-puhastuskolonni
■ Eemaldage DNA ilma DNaasi lisamata
■ Kõik lihtsad toimingud viiakse lõpule toatemperatuuril
■ Kiire töö saab lõpule viia 30 minutiga
■ Ohutu – orgaanilist reaktiivi pole vaja
■ Kõrge puhtusastmega -OD260/280≈1,8-2,1
Komplekti rakendus
See sobib kogu RNA ekstraheerimiseks ja puhastamiseks erinevatest värsketest või külmutatud loomsetest kudedest või kultiveeritud rakkudest.
Toote parameetrid
■ Allavoolu rakendused: esimese ahela cDNA süntees, RT-PCR, molekulaarne kloonimine, Northern Blot jne.
■ Proovid: loomsed koed, kultiveeritud rakud
■ Annustamine: koed 10–20 mg, rakud (2–5) × 106
■ Puhastuskolonni maksimaalne DNA sidumisvõime: 80 μg
■ Elueerimise maht: 50-200 μl
Diagramm
Animal Total RNA Isolation Kit töödeldud 20mg
Värsked hiireproovid, võtke 5% puhastatud üld-RNA-d ja 1% agarit
Glükogeeli elektroforees
1: põrn 2: neer
3: maks 4: süda
Ladustamine ja säilivusaeg
Komplekti saab hoida 24 kuud toatemperatuuril (15–25 ℃) või 2–8 ℃ kauem.Puhvrit RL1 võib pärast β-merkaptoetanooli (valikuline) lisamist säilitada 4 ℃ juures 1 kuu.
Viidatud artiklid
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R. jt.mRNA-ga laetud lipiiditaolised nanoosakesed maksa aluse redigeerimiseks keskse komposiitkujunduse optimeerimise kaudu.Adv.Funktsioon.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J jt.Rakkude spontaanne apoptoos terapeutilises tüvirakkude valmistamises avaldab fosfatidüülseriini vabanemise kaudu immunomoduleerivat toimet.Signal Transduct Target Ther.2021, 14. juuli; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.KUI: 17.97: Dai Z, Liu H, Liao J jt.N7-metüülguanosiini tRNA modifikatsioon suurendab onkogeenset mRNA translatsiooni ja soodustab intrahepaatilise kolangiokartsinoomi progresseerumist.Mol Cell.2021, 29. juuli: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.KUI: 9,225: Cao X, Shu Y, Chen Y jt.Mettl14-vahendatud m6A modifikatsioon hõlbustab maksa taastumist, säilitades endoplasmaatilise retiikulumi homöostaasi.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633–651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA isolatsioonikomplektid muud näidisallikadon saadaval:
Rakk, taim, viirus, veri jne.
RNA-d ei ekstraheerita või RNA saagis on madal
Taastumise efektiivsust mõjutavad sageli mitmesugused tegurid, näiteks: koeproovi RNA sisaldus, töömeetod, elueerimismaht jne.
1. Töötamise ajal viidi läbi jäävannis või krüogeenne (4 °C) tsentrifuugimine.
Soovitus: Töötage kogu protsessi vältel toatemperatuuril (15-25 °C), ärge jäävannis ega tsentrifuugige madalal temperatuuril.
2. Proovide ebaõige säilitamine või liiga pikk säilitusaeg.
Soovitus: hoida proove temperatuuril -80 °C või külmutada vedelas lämmastikus ja vältida korduvat külmutamist-sulatamist;proovige RNA ekstraheerimiseks kasutada värskeid kudesid või kultiveeritud rakke.
3. Ebapiisav proovi lüüs.
Soovitus: koe homogeniseerimisel veenduge, et kude oleks piisavalt homogeniseeritud ja et koerakud oleksid piisavalt lõhenenud, et selgitada RNA vabanemist.
4. Eluenti pole õigesti lisatud.
Soovitus: veenduge, et RNaasivaba ddH2Puhastuskolonni membraani keskele lisatakse tilkhaaval O.
5. Puhvrisse RL2 või puhvrisse RW2 ei lisatud õiget kogust absoluutset etanooli.
Soovitus: järgige juhiseid, lisage puhvrisse RL2 ja puhvrisse RW2 õige kogus absoluutset etanooli ning segage enne komplekti kasutamist korralikult läbi.
6. Koeproovi annus ei ole sobiv.
Soovitus: kasutage 10–20 mg kude või (1–5) × 106rakke 500 μl puhvri RL1 kohta, kuna koe liigne kasutamine võib vähendada RNA ekstraheerimist.
7. Vale elueerimismaht või mittetäielik elueerimine.
Soovitus: Puhastuskolonni elueerimismaht on 50-200 μl;kui elueerimisefekt ei ole rahuldav, on soovitatav pikendada toatemperatuuril asetamise aega pärast eelsoojendatud RNaasivaba ddH lisamist2O, nt 5-10 min.
8. Puhastuskolonnis on pärast puhvri RW2 pesemist etanoolijääk.
Soovitus: Kui pärast puhvri RW2 pesemist, tühja katsuti tsentrifuugimist 1 minuti jooksul on etanoolijääke, võib tühja katseklaasi tsentrifuugimise aega pikendada 2 minutini või asetada puhastuskolonni 5 minutiks toatemperatuurile, et jääk-etanooli adekvaatselt eemaldada.
Puhastatud RNA laguneb
Puhastatud RNA kvaliteet on seotud selliste teguritega nagu proovi säilivus, RNaasi saastumine ja manipuleerimine jne.
1. Koeproove ei hoita õigel ajal.
Soovitus: Kui koeproove või rakke ei kasutata õigeaegselt pärast kogumist, külmutada kohe -80 °C või vedela lämmastiku juures.RNA eraldamiseks kasutage võimalusel äsja võetud koe- või rakuproovi.
2. Koeproovide korduv külmutamine-sulatamine.
Soovitus: koeproovide säilitamisel on parem lõigata need säilitamiseks väikesteks tükkideks ja nende kasutamisel eemaldada üks tükk, et vältida proovi korduvat külmutamist-sulatamist ja RNA lagunemist.
3. RNaasi sisestatakse või ei kanta operatsiooni ajal ühekordseid kindaid, maske vms.
Soovitus: RNA ekstraheerimise katseid on kõige parem teha eraldi RNA manipuleerimisruumides ja laud puhastatakse enne katset.
Katse ajal kandke ühekordselt kasutatavaid kindaid ja maske, et minimeerida RNaasi sissetoomisest põhjustatud RNA lagunemist.
4. Reaktiivid on kasutamise ajal saastunud RNaasiga.
Soovitus: Asendage seotud katsete jaoks uue loomade kogu RNA isolatsioonikomplektiga.
5. RNA manipuleerimisel kasutatavad tsentrifuugitorud, otsikud jne on saastunud RNaasiga.
Soovitus: veenduge, et RNA ekstraheerimiseks kasutatavad tsentrifuugitorud, otsikud, pipetid jne on kõik RNaasivabad.
Puhastatud saadud RNA mõjutab allavoolu katseid
Puhastuskolonnis puhastatud RNA, kui soolaioonid, valgusisaldus on liiga suur, mõjutab allavoolu katset, näiteks: pöördtranskriptsioon, Northern Blot et al.
1. Elueeritud RNA-s on soolaioonide jääke.
Soovitus: veenduge, et puhvrile RW2 on lisatud õige kogus etanooli, ja tehke 2 puhastuskolonni pesu tööks näidatud tsentrifugaalkiirusel;soolaioonide jääkide korral jätke puhastuskolonn 5 minutiks toatemperatuuril puhvrisse RW2 ja tsentrifuugige, et maksimeerida soolasaaste eemaldamist.
2. Etanooli jääk elueeritud RNA-s.
Soovitus: veenduge, et pärast puhvri RW2 pesemist teostage tühja katsuti tsentrifuugimine tööks näidatud tsentrifuugimiskiirusel, suurendage tühja katsuti tsentrifuugimise aega 2 minutini, kui etanoolijääke on veel, või jätke see pärast tühja katsuti tsentrifuugimist 5 minutiks toatemperatuurile, et maksimeerida etanoolijääkide eemaldamist.
