Cell Direct RT qPCR komplekt – SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready üheastmelised qRT-PCR komplektid
Kirjeldused
See komplekt kasutab ainulaadset lüüsipuhvri süsteemi, mis suudab kiiresti vabastada RNA kultiveeritud rakuproovidest RT-qPCR reaktsioonide jaoks, välistades sellega aeganõudva ja töömahuka RNA puhastamise protsessi.RNA matriitsi saab kätte vaid 7 minutiga.5×Direct RT Mix ja 2×Komplektis olevad otsesed qPCR Mix-SYBR reaktiivid võivad kiiresti ja tõhusalt saada reaalajas kvantitatiivseid PCR tulemusi.
5×Direct RT Mix ja 2×Direct qPCR Mix-SYBR omab tugevat inhibiitoritaluvust ja proovide lüsaati saab kasutada otse RT-qPCR mallina.See komplekt sisaldab ainulaadset RNA kõrge afiinsusega Foregene pöördtranskriptaasi ja Hot D-Taq DNA polümeraasi, dNTP-sid, MgCl2, reaktsioonipuhver, PCR optimeerija ja stabilisaator.
Tehnilised andmed
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komplekti komponendid
| I osa | Puhver CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Puhver ST | |
| II osa | DNA kustutuskumm |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX-i võrdlusvärv | |
| RNaasivaba ddH2O | |
| Juhised | |
Omadused ja eelised
■Lihtne ja tõhus: Cell Direct RT tehnoloogiaga saab RNA proove võtta vaid 7 minutiga.
■ Valimivajadus on väike, testida saab kuni 10 rakku.
■ Suur läbilaskevõime: suudab kiiresti tuvastada RNA rakkudes, mida on kultiveeritud 384, 96, 24, 12, 6 süvendiga plaatidel.
■ DNA Eraser suudab vabanenud genoome kiiresti eemaldada, mis vähendab oluliselt mõju järgnevatele katsetulemustele.
■ Optimeeritud RT- ja qPCR-süsteem muudab kaheetapilise RT-PCR-i pöördtranskriptsiooni tõhusamaks ja PCR-i spetsiifilisemaks ning RT-qPCR-i reaktsiooni inhibiitoritele vastupidavamaks.
Komplekti rakendus
Kasutusala: kultiveeritud rakud.
- Proovi lüüsil vabanev RNA: kehtib ainult selle komplekti RT-qPCR matriitsi puhul.
- Komplekti saab kasutada järgmistel eesmärkidel: geeniekspressiooni analüüs, siRNA-vahendatud geeni vaigistava toime kontrollimine, ravimite sõelumine jne.
Diagramm
Ladustamine ja säilivusaeg
Selle komplekti I osa tuleks hoida temperatuuril 4 ℃;II osa tuleks hoida temperatuuril -20 ℃.
Foregene Protease Plus II tuleks hoida temperatuuril 4℃, mitte külmutada temperatuuril -20 ℃.
Reaktiiv 2×Direct qPCR Mix-SYBR tuleks hoida temperatuuril -20℃pimedas;kui seda kasutatakse sageli, võib seda säilitada ka temperatuuril 4℃ lühiajaliseks säilitamiseks (kasutada ära 10 päeva jooksul).
Reaalajas PCR praimeri kujundamise põhimõtted
Forward Primer ja Reverse Primer
Real Time PCR jaoks on praimeri disain väga oluline.Praimerid on seotud PCR amplifikatsiooni spetsiifilisuse ja efektiivsusega ning neid saab kujundada järgmiste põhimõtete alusel:
Praimeri pikkus: 18-30 bp.
GC sisaldus: 40-60%.
Tm väärtus: Praimeri disainitarkvara, näiteks Primer 5, võib anda praimeri Tm väärtuse.Üles- ja allavoolu praimerite Tm väärtused peaksid olema võimalikult lähedased.Kasutada võib ka Tm arvutamise valemit: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR-i läbiviimisel valitakse tavaliselt anniilimistemperatuuriks temperatuur, mis on madalam kui praimeri Tm väärtus 5 °C (vastav anniilimistemperatuuri tõus võib suurendada PCR-reaktsiooni spetsiifilisust).
Praimerid ja PCR-tooted:
Disainpraimeri PCR amplifikatsiooniprodukti pikkus on eelistatavalt 100-150 bp.
Kujunduskruntide kasutamist malli teiseses struktuuripiirkonnas tuleks võimalikult palju vältida.
Vältige 2 või enama komplementaarse aluse moodustumist ülesvoolu ja allavoolu praimerite 3'-otste vahel.
Krundi 3′ klemmipõhja ei saa olla koos 3 täiendava järjestikuse G või C-ga.
Praimeritel endil ei saa olla komplementaarseid struktuure, vastasel juhul moodustub juuksenõelastruktuur, mis mõjutab PCR amplifikatsiooni.
ATCG tuleks praimeri järjestuses jaotada võimalikult ühtlaselt ja 3'-terminaalset alust tuleks vältida kui T.
Lisa 1: Cell Direct RT-qPCR komplekti komponentide lisapakk
1.Rakkude lüüsi lahus
|
| |||
| Komplekti komponendid (24 süvendiga lüüsisüsteem / kaev) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| osaI | Puhver CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puhver ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| osaII | DNA kustutuskumm | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Sega
|
| |
| Komplekti komponendid (20 μl reaktsioonisüsteem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNaasivaba ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Komplekti komponendid (20 μl reaktsioonisüsteem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX-i võrdlusvärv | 40 μl | 200 μl |
| RNaasivaba ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Kasutusjuhendid:
