Plant Total RNA isolation Kit Total RNA Purificaiton Kit taimedele, mis sisaldavad vähe polüsahhariide ja polüfenoole
Tehnilised andmed
50 ettevalmistust, 200 ettevalmistust
Komplektis kasutatakse Foregene välja töötatud tsentrifuugimiskolonni ja valemit, mis suudavad tõhusalt ekstraheerida kõrge puhtusastmega ja kvaliteetset kogu-RNA-d erinevatest madala polüsahhariidide ja polüfenoolide sisaldusega taimekudedest.Suure polüsahhariidide või polüfenoolide sisaldusega taimeproovide puhul on paremate RNA ekstraheerimistulemuste saamiseks soovitatav kasutada Plant Total RNA Isolation Plus Kit.Komplekt sisaldab DNA-puhastuskolonni, mis suudab kergesti eemaldada genoomse DNA supernatandist ja koelüsaadist.Ainult RNA-d sisaldav kolonn võib RNA-d tõhusalt siduda.Komplekt suudab korraga töödelda suurt hulka proove.
Kogu süsteem ei sisalda RNaasi, seega ei lagune puhastatud RNA.Puhver PRW1 ja puhver PRW2 võivad tagada, et saadud RNA ei ole saastunud valkude, DNA, ioonide ja orgaaniliste ühenditega.
Komplekti komponendid
| Puhver PSL1, puhver PS, puhver PSL2 |
| Puhver PRW1, puhver PRW2 |
| RNaasivaba ddH2O, DNA-puhastuskolonn |
| Ainult RNA-d sisaldav veerg |
| Juhised |
Omadused ja eelised
■ Töötamine toatemperatuuril (15-25 ℃) kogu protsessi vältel ilma jäävannita ja madalal temperatuuril tsentrifuugimiseta.
■ RNaasivaba komplekt, ei pea muretsema RNA lagunemise pärast.
■ DNA-puhastuskolonn seondub spetsiifiliselt DNA-ga, nii et komplekt saab eemaldada genoomse DNA saastumise ilma DNaasi lisamata.
■ Kõrge RNA saagis: ainult RNA-d sisaldav kolonn ja ainulaadne valem võivad RNA-d tõhusalt puhastada.
■ Kiire kiirus: lihtne kasutada ja saab valmis 30 minutiga.
■ Ohutus: orgaanilist reaktiivi pole vaja.
■ Kõrge kvaliteet: puhastatud RNA fragmendid on kõrge puhtusastmega, valkude ja muude lisanditeta ning sobivad erinevatele allavoolu eksperimentaalsetele rakendustele.
Komplekti rakendus
See sobib kogu RNA ekstraheerimiseks ja puhastamiseks madala polüsahhariidide ja polüfenoolide sisaldusega värsketest või külmutatud taimekoeproovidest (eriti värske taime lehekoest).
Töövoog
Diagramm
Plant Total RNA Isolation Kit Plus töödeldi 50 mg värskeid polüsahhariidide ja polüfenoolide lehti ning 5% puhastatud RNA-d testiti elektroforeesiga.
1: banaan
2: hõlmikpuu
3: puuvill
4: granaatõun
Ladustamine ja säilivusaeg
Komplekti saab säilitada 12 kuud toatemperatuuril (15–25 ℃) kuivas keskkonnas ja 2–8 ℃ kauem (24 kuud).
Puhvrit PSL1 saab säilitada temperatuuril 4 ℃ 1 kuu pärast 2-hüdroksü-1-etaantiooli (valikuline) lisamist.
Probleemide analüüsi juhend
Järgmine analüüs probleemidest, millega võite kokku puutudaTaim kokkuRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Tsentreerimiskolonn on ummistunud
Pöörlemiskolonni blokeerimine põhjustab RNA saagise vähenemise või seda ei saa isegi RNA saamiseks puhastada ning saadud RNA kvaliteet on madal.
Levinud põhjuste analüüs:
1. Proov ei ole täielikult katki.
Proovi mittetäielik killustumine võib blokeerida DNA puhastuskolonni, mis võib samuti mõjutada RNA saagist ja kvaliteeti.Soovitame proovide killustamisel kiiresti jahvatada sisse piisavas koguses vedelat lämmastikku, et proovide kuded, nagu rakuseinad ja rakuseinad, võimalikult palju lõhkuda.Polüfenoolpolüsahhariidide taimeproovide puhul soovitame kasutada Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2.Aspireerige DNA-puhastuskolonnist eraldatud supernatant, aspireerige võimalik rakupuru pellet.
Aspireeritud rakujäägi pellet võib RNA adsorptsiooniprotseduuride ajal ummistada ainult RNA-d sisaldava kolonni (vt protseduuri etappi 5, polüsahhariidpolüfenooli protseduuri etappi 6).Soovitame selle supernatandi aspireerimisel olla ettevaatlik, et vältida rakujäätmete aspireerimist.
3. Esialgne proovikogus on liiga suur.
Proovi liigne kasutamine põhjustab proovi mittetäieliku killustumise või rakkude mittetäieliku lüüsi puhvriga PRL1 või puhvriga PSL1, mille tulemuseks on puhastuskolonn ummistumine puhastustoimingute jaoks.Plant Total RNA Isolation Kit sisaldab algselt maksimaalselt 50 mg ühe käitatud proovi puhastamise kohta.Polüfenoolpolüsahhariidide taimeproovide puhul soovitame proovida Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Tsentrifuugi temperatuur on liiga madal.
Kogu RNA eraldamine ja puhastamine, välja arvatud proovikoe vedela lämmastikuga purustamine, viiakse kõik etapid läbi toatemperatuuril (20–25 °C).Mõne madala temperatuuriga tsentrifuugi temperatuur on alla 20 °C, mis võib põhjustada DNA puhastuskolonni ja/või ainult RNA-d sisaldava kolonni ummistusi.Kui see juhtub, seadke tsentrifuugi temperatuur 20–25 °C-ni ja eelsoojendage lüüsisegu ja/või etanooli eraldamise supernatandi lisamine temperatuurini 37 °C.
RNA-d ei ekstraheerita või RNA saagis on madal
Taaskasutamise efektiivsust mõjutavad tavaliselt paljud tegurid, näiteks: proovi RNA sisaldus, töömeetod, elueerimismaht jne.
Levinud põhjuste analüüs järgmiselt:
1. Operatsiooni ajal viidi läbi jäävannis või madalal temperatuuril (4°C) tsentrifuugimine.
Soovitus: Töötage kogu protsessi vältel toatemperatuuril (15-25°C), ärge tehke jäävanni ja madalal temperatuuril tsentrifuugimist.
2.RNA on lagunenud proovi ebaõige säilitamise või proovi pikaajalise säilitamise tõttu.
Soovitus: Värskelt kogutud proovid tuleb kiiresti külmutada vedelas lämmastikus ja seejärel säilitada -80°C juures pikka aega, vältida proovide korduvat külmutamist ja ülessulatamist;või leotada proove kohe RNA stabilisaatori RNAlater lahuses (loomproovid).
3.Proovi ebapiisav killustumine ja lüüs põhjustavad puhastuskolonni blokeerimise.
Soovitus: Koe jahvatamisel veenduge, et kude oleks piisavalt jahvatatud, ja viige see kiiresti eelnevalt ettevalmistatud puhvrisse PSL1 (kinnitage, et β-ME on lisatud õiges vahekorras, vt protseduuri 1. sammu).
4.Eluent lisati valesti.
Soovitus: veenduge, et RNaasivaba ddH2O tilgutatakse puhastuskolonni membraani keskele.
5. Puhvrisse PSL2 või puhvrisse PRW2 ei lisatud õiget kogust absoluutset etanooli.
Soovitus: järgige juhiseid, lisage puhvrile PSL2 ja puhvrile PRW2 õige kogus absoluutset etanooli ning segage enne komplekti kasutamist korralikult läbi.
6. Koeproovi kogus on sobimatu.
Soovitus: Kasutage 50 mg kudet 500 μl puhvri PSL1 kohta.Liiga suure koe kasutamine vähendab ekstraheeritud RNA kogust ja samuti väheneb saadud RNA puhtus.Soovitame tungivalt, et proovi esialgne annus ei ületaks 50 mg RNA ekstraheerimisoperatsiooni kohta.
7. Sobimatu elueerimismaht või mittetäielik elueerimine.
Soovitus: Puhastuskolonni eluendi maht on 50-200 μl;kui elueerimisefekt ei ole rahuldav, on soovitatav pikendada aega toatemperatuuril pärast eelsoojendatud RNaasivaba ddH lisamist2O, näiteks 5-10 min.
8. Puhastuskolonnis on pärast puhvriga PRW2 pesemist etanoolijääk.
Soovitus: Kui tühja katsutit tsentrifuugitakse 1 minut ja pärast pesemist puhvris PRW2 on alles etanooli, võite tühja katseklaasi tsentrifuugimise aega pikendada 2 minutini või asetada puhastuskolonn 5 minutiks toatemperatuurile, et jääk-etanooli täielikult eemaldada.
9.Komplekti kasutati valesti.
Soovitus: polüfenoolsete polüsahhariidide taimeproovide puhul ei pruugi olla võimalik saada ideaalseid RNA proove, kasutades tavalisi komplekte, nagu Plant Total RNA Isolation Kit.Soovitame teil kasutada Plant Total RNA IsolationKit Plus, mis on spetsiaalselt loodud polüfenoolsete polüsahhariidide taimeproovide jaoks.Komplekt, mis on spetsiaalselt välja töötatud RNA ekstraheerimiseks polüfenoolide ja polüsahhariidide taimeproovidest.
OD260/OD280 väärtus on madal
RNA elueerimine ddH-ga2O ja seda kasutatakse spektrofotomeetri näitude jaoks, tulemuseks on madalad OD260/OD280 väärtused.Soovitame kasutada 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (rnaasivaba ddH asemel2O RNA elueerimiseks), et saada suhteliselt õiged OD260/OD280 väärtused, vt “RNA kontsentratsiooni- ja puhastusanalüüsid” lk 19.
Puhastatud RNA laguneb
Puhastatud RNA kvaliteet on seotud selliste teguritega nagu proovide säilitamine, RNaasi saastumine ja manipuleerimine.
Tavaliste põhjuste analüüs:
1. Koeproove ei säilitatud õigeaegselt pärast kogumist.
Soovitus: Kui koeproove ei kasutata õigeaegselt pärast kogumist, hoidke neid kohe madalal temperatuuril vedelas lämmastikus või viige need pärast kiirkülmutamist vedelas lämmastikus pikaajaliseks säilitamiseks temperatuurini -80°C või kastke proovid kohe RNA stabilisaatori RNAlater lahusesse (loomaproovid).RNA ekstraheerimiseks proovige kasutada värskelt kogutud koeproove.
2.Koeproovide korduv külmutamine ja sulatamine.
Soovitus: Koeproovide säilitamisel on parem lõigata need säilitamiseks väikesteks tükkideks ja kasutamisel osa neist välja võtta, et vältida proovide korduvast külmutamisest ja sulatamisest põhjustatud RNA lagunemist.
3. Operatsiooniruumis võetakse kasutusele RNaasi või ei kanta ühekordseid kindaid, maske jne.
Soovitus: RNA ekstraheerimise katseid on kõige parem teha eraldi RNA operatsioonidena ning laborilaud tuleks enne katset puhastada ning katse ajal kanda ühekordseid kindaid ja maske, et vältida RNA degradeerumist, mis on põhjustatud RNaasi sissetoomisest suurimal määral.
4. Reaktiiv on kasutamise ajal saastunud RNaasiga.
Soovitus: Asendage seotud katsete jaoks uue taime kogu RNA ekstraheerimise komplektidega.
5. RNA-ga manipuleerimiseks kasutatud tsentrifuugitorud ja pipetiotsad on saastunud RNaasiga.
Soovitus: Veenduge, et RNA ekstraheerimisel kasutatavad tsentrifuugitorud, pipetiotsad, pipetid jne on kõik RNaasivabad.
Kasutusjuhendid:
