QuickEasyᵀᴹ Reaalajas PCR Kit-Taqman
Kirjeldused
2× QuickEasyTMReal PCR Mix-Taqman, mida pakub QuickEasyTMReal Time PCR Kit-Taqman komplekt on uue põlvkonna põhisegude süsteem, mis on loodud reaalajas PCR amplifikatsioonireaktsiooniks, kasutades spetsiifilisi fluorestseeruvaid sonde.Selle põhiline Foregene HS Taq DNA polümeraas põhineb antikeha modifikatsioonil, mida kasutatakse koos Foregene täiendavalt optimeeritud PCR süsteemiga, sellel on suurem spetsiifilisus ja amplifikatsiooni efektiivsus.Võrreldes tavalise PCR-seguga on sellel tugevam võimendusvõime ja madalam mittevastavuse määr.Seda saab kasutada fluorestsents-kvantitatiivses PCR-reaktsioonis, et vähendada mittespetsiifilist amplifikatsiooni ja parandada PCR-i täpsust.See võib oluliselt parandada toote spetsiifilisust ja reaktsioonitundlikkust.Samal ajal pakuti sisemise võrdlusvärvina ROX-i.
QuickEasyTMReal Time PCR Kit-Taqmani komplektil on lai kasutusala matriitsi kogusele ja see võib saada hea standardkõvera erinevates kvantitatiivsetes piirkondades ning suudab sihtgeene täpselt kvantifitseerida ja tuvastada hea korratavusega ja suure usaldusväärsusega.
Tehnilised andmed
200 ettevalmistust,500 ettevalmistust,1000 ettevalmistust,2000 Ettevalmistused
Komplekti komponendid
QuickEasyTMReaalajas PCR Kit-Taqman(20μlsüsteem) | ||||
Komplekti sisu | QP-01121 | QP-01122 | QP-01123 | QP-01124 |
200 ettevalmistustööd | 500 ettevalmistust | 1000 ettevalmistust | 2000 Ettevalmistused | |
2×KiirestiLihtneTM Tõeline PCR Sega- Taqman | 1 ml×2 | 1,7 ml×3 | 1,7 ml×6 | 1,7 ml×12 |
20×ROX-i võrdlusvärv | 200μL | 0,5 ml | 1 ml | 1 ml×2 |
DNaasivaba ddH2O | 1,7 ml | 1,7 ml×2 | 10 ml | 20 ml |
KUI SA | 1tükk | 1tükk | 1tükk | 1tükk |
Omadused ja eelised
■ Unikaalne PCR-i optimeerimissüsteem teeb 2×QuicEasyTMReal PCR Mix-Taqman ühilduvam.
■ Kuumkäivitusega Foregene HS Taq Polymerase'il on kõrgem amplifikatsioonitõhusus, suurem võimendustundlikkus ja kõrgem amplifikatsioonispetsiifilisus.
■ 2× QuickEasyTM Real PCR Mix -Taqman kasutab järjestusspetsiifilise sondi tuvastamise tundlikkuse ja spetsiifilisuse parandamiseks Foregene optimeeritud ainulaadset süsteemi, mida saab kasutada genotüpiseerimiseks ja koopiate arvu variatsioonide määramiseks ning täpsete tulemuste saamiseks.
■ Selle tootega on kaasas ROX-i sisemine võrdlusvärv, mida saab kasutada signaali tausta ja signaali vigade kõrvaldamiseks süvendite vahel, mida on klientidel mugav kasutada erinevat tüüpi kvantitatiivsetes PCR-seadmetes.
Komplekti rakendus
■ Fluorestsents-kvantitatiivne PCR matriitsi kvantitatiivseks analüüsiks;
■ Ctavapärane PCR amplifikatsioon;
■ Võib kasutada alleeli tuvastamiseks.
Ladustamine ja säilivusaeg
Komplekti tuleb hoida -20°C juures pimedas;kui seda kasutatakse sageli, võib seda ka lühikest aega säilitada temperatuuril 4°C (kasutada 10 päeva jooksul).
Reaalajas PCR praimeri kujundamise põhimõtted
Forward Primer ja Reverse Primer
Real Time PCR jaoks on praimeri disain väga oluline.Praimerid on seotud PCR amplifikatsiooni spetsiifilisuse ja efektiivsusega ning neid saab kujundada järgmiste põhimõtete alusel:
Praimeri pikkus: 18-30 bp.
GC sisaldus: 40-60%.
Tm väärtus: Praimeri disainitarkvara, näiteks Primer 5, võib anda praimeri Tm väärtuse.Üles- ja allavoolu praimerite Tm väärtused peaksid olema võimalikult lähedased.Kasutada võib ka Tm arvutamise valemit: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR-i läbiviimisel valitakse tavaliselt anniilimistemperatuuriks temperatuur, mis on madalam kui praimeri Tm väärtus 5 °C (vastav anniilimistemperatuuri tõus võib suurendada PCR-reaktsiooni spetsiifilisust).
Praimerid ja PCR-tooted:
Disainpraimeri PCR amplifikatsiooniprodukti pikkus on eelistatavalt 100-150 bp.
Kujunduskruntide kasutamist malli teiseses struktuuripiirkonnas tuleks võimalikult palju vältida.
Vältige 2 või enama komplementaarse aluse moodustumist ülesvoolu ja allavoolu praimerite 3'-otste vahel.
Krundi 3′ klemmipõhja ei saa olla koos 3 täiendava järjestikuse G või C-ga.
Praimeritel endil ei saa olla komplementaarseid struktuure, vastasel juhul moodustub juuksenõelastruktuur, mis mõjutab PCR amplifikatsiooni.
ATCG tuleks praimeri järjestuses jaotada võimalikult ühtlaselt ja 3'-terminaalset alust tuleks vältida kui T.
Lisa 1: Cell Direct RT-qPCR komplekti komponentide lisapakk
1.Rakkude lüüsi lahus
| |||
Komplekti komponendid (24 süvendiga lüüsisüsteem / kaev) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 T | 500 T | ||
osaI | Puhver CL | 20 ml | 100 ml |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
Puhver ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
osaII | DNA kustutuskumm | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Sega
| |
Komplekti komponendid (20 μl reaktsioonisüsteem) | DRT-01011-B1 |
200 T | |
5× Direct RT Mix | 800 μl |
RNaasivaba ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| ||
Komplekti komponendid (20 μl reaktsioonisüsteem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
200 T | 1000 T | |
2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
50× ROX-i võrdlusvärv | 40 μl | 200 μl |
RNaasivaba ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |