Bukaaltampooni/FTA kaardi DNA eraldamise komplekt Genoomse DNA ekstraheerimise või puhastamise komplekt bukaaltampoonidest
Komplekti kirjeldus:
Puhastage kiiresti kõrgekvaliteediline genoomne DNA bukaaltampooni/FTA kaardi proovidest.
◮RNaasi saastumine puudub:Komplektiga kaasas olev ainult DNA-d sisaldav kolonn võimaldab eemaldada RNA genoomsest DNA-st ilma RNaasi lisamata katse ajal, vältides labori saastumist eksogeense RNaasiga.
◮Kiire kiirus:Foregene proteaasil on suurem aktiivsus kui sarnastel proteaasidel ja see seedib koeproove kiiresti;toiming on lihtne ja genoomse DNA ekstraheerimise toimingu saab lõpule viia 20–80 minuti jooksul.
◮Mugav:Tsentrifuugimine toimub toatemperatuuril ja ei ole vaja 4 °C madalal temperatuuril tsentrifuugimist ega DNA etanoolisadestamist.
◮Ohutus:Orgaanilise reaktiivi ekstraheerimine pole vajalik.
◮Kõrge kvaliteet:Ekstraheeritud genoomses DNA-s on suured fragmendid, puudub RNA, RNaasi ja äärmiselt madal ioonide sisaldus, mis vastab erinevate katsete nõuetele.
◮Mikroelueerimissüsteem:See võib suurendada genoomse DNA kontsentratsiooni, mis on mugav allavoolu tuvastamiseks või katsetamiseks.
Kirjeldus
See komplekt pakub tõhusat ja kiiret meetodit kõrge kontsentratsiooniga genoomse DNA saamiseks põse tampoonidest ja FTA kaardist (verelaigud).Kasutades meie ettevõtet'Unikaalne ainult DNA-d sisaldav ränidioksiidi membraani pöörlemiskolonn ja valem, mis on kombineeritud Foregene Protease'iga, võimaldab kõrge kontsentratsiooniga ja kvaliteetset genoomset DNA-d ekstraheerida 80 minutiga.Spetsiaalselt disainitud väike puhastuskolonn seob genoomse DNA ja DNA-d saab elueerida väikese kogusega (15μl) elueerimissüsteem, et suurendada saadud genoomse DNA kontsentratsiooni, mis on mugav allavoolu tuvastamiseks või katsetamiseks.Komplektis saab korraga töödelda üht või mitut proovi ning puhastusprotsess ei nõua orgaaniliste ainete, nagu fenool, kloroform, ekstraheerimist ega aeganõudvat isopropanooli või etanooli sadestamist ning toiming on lihtne ja aegasäästlik.
Tehnilised andmed
50 Ettevalmistused
Komplekti komponendid
| Puhver ST1 |
| Puhver ST2 |
| Lineaarne akrüülamiid |
| Puhver PW |
| Puhver WB |
| Puhver EB |
| Foregene proteaas |
| Ainult DNA-d sisaldav veerg |
| Juhised |
Omadused ja eelised
- RNaasi saastumine puudub: komplektiga kaasas olev ainult DNA-d sisaldav kolonn võimaldab eemaldada RNA genoomsest DNA-st ilma RNaasi lisamata katse ajal, vältides labori saastumist eksogeense RNaasiga.
-Kiire kiirus: Foregene Proteaasil on suurem aktiivsus kui sarnastel proteaasidel, seedib proove kiiresti;lihtne operatsioon.
- Mugav: tsentrifuugimine toimub toatemperatuuril ja ei ole vaja 4 °C madalal temperatuuril tsentrifuugimist ega DNA etanoolisadestamist.
-Ohutus: orgaanilise reaktiivi ekstraheerimine pole vajalik.
-Kõrge kvaliteet: Ekstraheeritud genoomsel DNA-l on suured fragmendid, puudub RNA, RNaasi ja äärmiselt madal ioonide sisaldus, mis vastab erinevate katsete nõuetele.
-Mikroelueerimissüsteem: see võib suurendada genoomse DNA kontsentratsiooni, mis on mugav allavoolu tuvastamiseks või katsetamiseks.
Komplekti rakendus
See sobib genoomse DNA puhastamiseks järgmistest proovidest: põse tampoonid, FTA Card (vereplekid).
Ladustamine ja säilivusaeg
-Seda komplekti saab säilitada 12 kuud kuivades tingimustes toatemperatuuril (15-25°C);kui on vaja pikemat aega säilitada, siis säilib 2-8°C juures.
Märkus. Kui lahust hoitakse madalal temperatuuril, võib see sadestuda.Enne kasutamist asetage lahus kindlasti teatud ajaks komplekti toatemperatuurile.Vajadusel eelsoojendage seda 37°C veevannis 10 minutit, et sade lahustuks, ja segage enne kasutamist.
-Foregene Protease lahus on ainulaadse valemiga, mis on aktiivne pikaajalisel (3 kuud) toatemperatuuril säilitamisel;selle aktiivsus ja stabiilsus on parem, kui seda hoitakse temperatuuril 4°C, seega on soovitatav seda hoida temperatuuril 4°C, ärge unustage hoida -20°C juures.
Puhastuskolonn on ummistunud
Selles komplektis adsorbeeritakse genoomse DNA ekstraheerimise käigus puhastuskolonn otse proovi ensümaatilise lüüsi segule ilma tsentrifuugimiseta ning puhastuskolonn võib olla blokeeritud mittetäieliku ensümiseerimise ja proovi kõrge viskoossuse tõttu.
Järgmised võimalikud põhjused on järgmised:
1. Koeproovide mittetäielik ensümaatiline seedimine.
Soovitus: Foregene Protease proovi töötlemise aega saab vastavalt pikendada või supernatanti võtta pärast tsentrifuugimist kiirusel 12 000 p/min (~13 400 × g) 5 minutit.
2. Koeproovide või suurte kudede liigne kasutamine.
Soovitus: proovis on kõige parem mitte ületada 1 bukaalset tampooni;kui proov on liiga suur, suurendage vastavalt puhvri ST1, Foregene Protease ja puhvri ST2 annust.
3. Proovi viskoossus on liiga kõrge.
Soovitus: Enne genoomse DNA ekstraheerimist võib proove sobivalt lahjendada 10 mM Tris-HCl-ga.
4. Verekaardi killud on imetud.
Soovitus. Veretäpi (FTA Card) genoomse ekstraheerimise etapi 6 mööduvat tsentrifuugimise aega saab vastavalt pikendada.
Madal saagikus või puudub DNA
Genoomse DNA saagist mõjutavad sageli mitmesugused tegurid, sealhulgas proovi päritolu, proovi säilitamise tingimused, proovi ettevalmistamine, manipuleerimine jne.
Ekstraheerimise käigus ei saa genoomset DNA-d saada
Võimalikud põhjused on järgmised:
1. Proovide ebaõige säilitamine või liiga pikk säilitamine viib genoomse DNA lagunemiseni.
Soovitus: Suust võetud tampooniproovid tuleks eelistatavalt võtta värskelt ning konserveeritud tampooniproovide kasutamine genoomse DNA ekstraheerimiseks ei ole soovitatav;veretäppproovid peaksid tagama, et kvaliteet on kvalifitseeritud ja säilitusaeg ei tohiks olla liiga pikk.
2. Liiga vähese koe kasutamise tulemusena ei pruugita vastavat genoomset DNA-d ekstraheerida.
Soovitus: järgige tegevusjuhendis bukaalsest tampooniproovi võtmise juhiseid ja pühkige nii palju kordi kui võimalik, et suukaudsele tampoonile saaks genoomse DNA ekstraheerimiseks piisavalt rakke kinnitada;verelaikude proovide võtmiseks saab veretäpi lõikamisala vastavalt suurendada.
3. Foregene Protease on valesti säilinud, mille tulemuseks on selle aktiivsuse vähenemine või inaktiveerimine.
Soovitus: Kinnitage Foregene Protease säilitamistingimused või asendage see ensümaatilise reaktsiooni jaoks uue Foregene Protease'ga.
4. Komplekti ebaõige säilitamine või säilitusaeg on liiga pikk, mille tulemuseks on mõne komplekti komponendi rike.
Soovitus: ostke seotud protseduuride jaoks uus bukaalse tampooni DNA isolatsioonikomplekt.
5. Puhver WB ei lisa absoluutset etanooli.
Soovitus: veenduge, et puhver WB lisab õige koguse absoluutset etanooli.
6. Eluenti ei ole silikoonkilele õigesti lisatud.
Soovitus: lisage 65 °C eelsoojendatud eluenditilgad silikoonmembraani keskele ja jätke elueerimise efektiivsuse suurendamiseks 5 minutiks toatemperatuurile.
Eraldatud madala saagisega genoomne DNA
Järgmised võimalikud põhjused on järgmised:
1. Proovide ebaõige säilitamine või liiga pikk säilitamine viib genoomse DNA lagunemiseni.
Soovitus: Suust võetud tampooniproovid võetakse eelistatavalt värskelt ja konserveeritud tampooniproove ei tohiks kasutada genoomse DNA ekstraheerimiseks.
2. Kui koeproovi kogus on liiga väike, on eraldatud genoomse DNA sisaldus väiksem.
Soovitus: järgige kasutusjuhendis olevaid suust võetud tampooniproovide võtmise juhiseid, pühkige nii palju kordi kui võimalik, et suukaudsele tampoonile saaks genoomse DNA ekstraheerimiseks kinnitada piisavalt rakke.
3. Foregene Protease on valesti säilinud, mille tulemuseks on selle aktiivsuse vähenemine või inaktiveerimine.
Soovitus: Kinnitage Foregene Protease säilitamistingimused või asendage see ensümaatilise reaktsiooni jaoks uue Foregene Protease'ga.
4. Eluendi probleemid.
Soovitus: Elueerimiseks kasutage puhvrit EB;kui kasutate ddH2O või muud eluendid, kinnitage, et eluaadi pH on vahemikus 7,0-8,5.
5. Eluaati ei ole õigesti tilkhaaval lisatud.
Soovitus: lisage eluenditilgad silikoonmembraani keskele ja jätke elueerimise efektiivsuse suurendamiseks 5 minutiks toatemperatuurile.
6. Elueerimisvedelikku koguneb liiga vähe.
Soovitus: Kasutage genoomse DNA elueerimiseks juhendis nõutud eluenti, vähemalt 15 μl.
Eraldatud genoomse DNA madal puhtusaste
Madal genoomse DNA puhtus võib põhjustada allavoolu katsete ebaõnnestumist või ebarahuldavaid tulemusi, näiteks: ensüüme ei saa lahti lõigata, PCR ei saa huvipakkuvat geenifragmenti jne.
Võimalikud põhjused on järgmised:
1. Heteroproteiini saaste, RNA saaste.
Analüüs: Puhastuskolonni ei pestud puhvriga PW;puhver-PW pesupuhastuskolonni ei pestud õiget tsentrifugaalkiirust kasutades.
Soovitus: enne etanooli lisamist veenduge, et supernatandis poleks sadet;peske puhastuskolonni kindlasti vastavalt juhistele ja seda sammu ei saa vahele jätta.
2. Lisandite ioonireostus.
Analüüs: Puhvri WB pesupuhastuskolonn jäeti välja või pesti ainult üks kord, mille tulemuseks oli jääk-ioonne saastumine.
Soovitus: peske puhvrit WB 2 korda vastavalt juhistele, et eemaldada võimalikult palju jääkioonid.
3. RNA ensüümi saastumine.
Analüüs: puhvrisse lisati võõr-RNaasid;Puhvri PW pesuoperatsioon oli vale, mille tulemuseks olid RNaasi jäägid, mis mõjutasid allavoolu RNA eksperimentaalseid operatsioone, näiteks in vitro transkriptsiooni.
Soovitus: Foregene seeria nukleiinhapete isolatsioonikomplektid võivad eemaldada RNA ilma täiendava RNaasi lisamiseta, seega ei pea bukaalne tampooni/FTA kaardi DNA isolatsioonikomplekt RNaasi lisama;järgige kindlasti Puffer PW pesupuhastuskolonni juhiseid ja seda sammu ei saa vahele jätta.
4. Etanooli jääk.
Analüüs: Puhver WB ei teostanud pärast puhastuskolonni pesemist tühja toru tsentrifuugimist.
Soovitus: viige läbi õige tühja katsuti tsentrifuugimine vastavalt juhistele.
5. Muu lisandireostus.
Analüüs: salvestatud proove või eriproove ei töödelda.
Soovitus: eeltöötlege proovi põhjalikult vastavalt juhistele.
