Plant Total RNA isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit polüsahhariidide ja polüfenoolide poolest rikastele taimedele
Komplekti kirjeldus:
Kat.nr.RE-05021/05022/05024
Kogu RNA puhastamiseks üldistest taimeproovidest, mis sisaldavad kõrge polüsahhariidi ja polüfenooli komponente.
Kiiresti ekstraheerige kõrge polüsahhariidide ja polüfenoolide sisaldusega taimeproovidest kvaliteetne kogu RNA.
RNaasivaba, kasutades DNA puhastuskolonni
Lihtne – kõik toimingud tehakse toatemperatuuril
Kiire – toimingu saab lõpetada 30 minutiga
Ohutu – orgaanilist reaktiivi ei kasutata 
Tehnilised andmed
50 ettevalmistust, 200 ettevalmistust
Komplekt kasutab Foregene välja töötatud tsentrifuugimiskolonni ja valemit, mis suudab tõhusalt ekstraheerida kõrge puhtusastmega ja kvaliteetset kogu-RNA-d erinevatest kõrge polüsahhariidide või polüfenoolide sisaldusega taimekudedest.See pakub DNA-puhastuskolonni, mis suudab kergesti eemaldada genoomse DNA supernatandist ja koelüsaadist.Ainult RNA-d sisaldav kolonn võib RNA-d tõhusalt siduda.Komplekt suudab korraga töödelda suurt hulka proove.
Kogu süsteem ei sisalda RNaasi, seega ei lagune puhastatud RNA.Puhver PRW1 ja puhver PRW2 võivad tagada, et saadud RNA ei ole saastunud valkude, DNA, ioonide ja orgaaniliste ühenditega.
Komplekti komponendid
| Puhver PSL1, puhver PS, puhver PSL2 |
| Puhver PRW1, puhver PRW2 |
| RNaasivaba ddH2O, DNA-puhastuskolonn |
| Ainult RNA-d sisaldav veerg |
Omadused ja eelised
■ Töötamine toatemperatuuril (15-25 ℃) kogu protsessi vältel ilma jäävannita ja madalal temperatuuril tsentrifuugimiseta.
■ RNaasivaba komplekt, ei pea muretsema RNA lagunemise pärast.
■ Eriti sobiv RNA puhastamiseks polüsahhariidide ja polüfenoolide taimeproovidest.
■ DNA-puhastuskolonn seondub spetsiifiliselt DNA-ga, nii et komplekt saab eemaldada genoomse DNA saastumise ilma DNaasi lisamata.
■ Kõrge RNA saagis: ainult RNA-d sisaldav kolonn ja ainulaadne valem võivad RNA-d tõhusalt puhastada.
■ Kiire kiirus: lihtne kasutada ja saab valmis 30 minutiga.
■ Ohutus: orgaanilist reaktiivi pole vaja.
■ Kõrge kvaliteet: puhastatud RNA fragmendid on kõrge puhtusastmega, valkude ja muude lisanditeta ning sobivad erinevatele allavoolu eksperimentaalsetele rakendustele.
Toote parameetrid
■ Allavoolu rakendused: esimese ahela cDNA süntees, RT-PCR, molekulaarne kloonimine, Northern Blot jne.
■ Proov: polüsahhariidide ja polüfenoolide värsked või külmutatud taimekoed
■ Annustamine: 50mg taimekude
■ Puhastuskolonni maksimaalne RNA sidumisvõime: 80 μg
■ Elueerimise maht: 50-200 μl
Komplekti rakendus
See sobib kogu RNA ekstraheerimiseks ja puhastamiseks kõrge polüsahhariidide ja polüfenoolide sisaldusega värsketest või külmutatud taimekoeproovidest (eriti värske taime lehekoest).
Töövoog
Diagramm
Plant Total RNA Isolation Kit Plus töödeldi 50 mg värskeid polüsahhariidide ja polüfenoolide lehti ning 5% puhastatud RNA-d testiti elektroforeesiga.
1: banaan
2: hõlmikpuu
3: puuvill
4: granaatõun
Ladustamine ja säilivusaeg
Seda komplekti saab säilitada 24 kuud kuivades tingimustes toatemperatuuril (15-25 ℃);kui seda on vaja pikemalt säilitada, võib seda säilitada temperatuuril 2–8 ℃.
Puhvrit PSL1 võib pärast β-merkaptoetanooli lisamist hoida temperatuuril 4 ℃ 1 kuu jooksul (soovitav on see lisada katsega samal ajal).
Kolonn kinni
Pärast kolonni ummistumist väheneb RNA saagis või on RNA puhastamine isegi võimatu ja saadud RNA mass on väike.
Üldise põhjuse analüüs:
1. Proovipausid ei ole põhjalikud.
Proovi purunemine ei põhjusta DNA PUHASTAMISVEERUNI täielikku blokeerimist, mõjutades samal ajal RNA saagist ja kvaliteeti.Proovide purustamisel soovitame kiiresti jahvatada piisavas koguses vedelas lämmastikus. Proovige proovi rakusein, rakumembraan ja muud kuded purustada.Polüoolpolüsahhariidide taimeproovide puhul soovitame kasutada Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Eraldatud proovi supernatandi imemisel DNA-puhastuskolonniga võib võimalikku raku fragmenteeritud sadet sisse hingata.
Võetud raku killustatud setted põhjustavad ONLY-RNA-kolonni, mis blokeeritakse, kui RNA adsorptsioonioperatsioon sooritatakse (vt 6. sammu).Soovitame teil seda supernatanti imeda hoolikalt, et vältida rakujäätmete imemist.
3. Proovi esialgne kogus on liiga palju.
Proovi liigne kasutamine põhjustab proovi mittetäieliku fragmenteerumise või rakkude mittetäieliku lüüsi puhvriga PSL1, mille tulemuseks on puhastuskolonni blokeerimine puhastamise ajal.Plant Total RNA isolation Kit Iga üksik puhastatud tööproov on 50 mg.Polüoolpolüsahhariidide taimeproovide puhul soovitame proovida Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Tsentrifuugi temperatuur on liiga madal.
Kogu RNA eraldamise ja puhastamise protsess viiakse läbi toatemperatuuril (20-25°C), välja arvatud see, et proovi kude purustatakse vedela lämmastiku toimel. Mõne krüogeense tsentrifuugi temperatuur on madalam kui 20℃, mis võib põhjustada DNA-puhastuskolonni ja/või ainult RNA-d sisaldava kolonni blokeerimist.Kui see juhtub, seadke tsentrifuugi temperatuur 20–25 kraadini℃javeenduge, et lüüsisegu ja/või etanooliga lisatud supernatant oleks eelsoojendatud temperatuurini 37°C.
RNA-d ei ekstraheerita või RNA saagis on madal
Taaskasutamise efektiivsust mõjutavad tavaliselt paljud tegurid, näiteks: proovi RNA sisaldus, töömeetod, elueerimismaht jne.
Levinud põhjuste analüüs järgmiselt:
1. Operatsiooni ajal viidi läbi jäävannis või madalal temperatuuril (4°C) tsentrifuugimine.
Soovitus: Töötage toatemperatuuril (15-25°C) kogu protsessi jooksul ärge tehke jäävanni ja madalal temperatuuril tsentrifuugimist.
2. RNA on lagunenud proovi ebaõige säilitamise või proovi pikaajalise säilitamise tõttu.
Soovitus: Värskelt kogutud proovid tuleb kiiresti külmutada vedelas lämmastikus ja seejärel säilitada -80°C juures pikka aega, vältida proovide korduvat külmutamist ja ülessulatamist;või leotada proove kohe RNA stabilisaatori RNAlater lahuses (loomproovid).
3. Proovi ebapiisav killustumine ja lüüs põhjustavad puhastuskolonni blokeerimise.
Soovitus: Koe jahvatamisel veenduge, et kude oleks piisavalt jahvatatud, ja viige see kiiresti eelnevalt ettevalmistatud puhvrisse PSL1 (kinnitage, et β-ME on lisatud õiges vahekorras, vt protseduuri 1. sammu).
4.Eluent lisati valesti.
Soovitus: Veenduge, et RNaasivaba ddH2O tilgutatakse puhastuskolonni membraani keskele.
5. Puhvrisse PSL2 või puhvrisse PRW2 ei lisatud õiget kogust absoluutset etanooli.
Soovitus: järgige juhiseid, lisage puhvrile PSL2 ja puhvrile PRW2 õige kogus absoluutset etanooli ning segage enne komplekti kasutamist korralikult läbi.
6. Koeproovi kogus on sobimatu.
Soovitus: Kasutage 50 mg kudet 500 μl puhvri PSL1 kohta.Liiga suure koe kasutamine vähendab ekstraheeritud RNA kogust ja samuti väheneb saadud RNA puhtus.Soovitame tungivalt, et proovi esialgne annus ei ületaks 50 mg RNA ekstraheerimisoperatsiooni kohta.
7.Sobimatu elueerimismaht või mittetäielik elueerimine.
Soovitus: Puhastuskolonni eluendi maht on 50-200 μl;kui elueerimisefekt ei ole rahuldav, on soovitatav pikendada pärast eelsoojendatud RNaasivaba ddH2O lisamist toatemperatuuril aega, näiteks 5-10 min.
8. Puhastuskolonnis on pärast puhvriga PRW2 pesemist etanoolijääk.
Soovitus: Kui tühja katsutit tsentrifuugitakse 1 minut ja pärast pesemist puhvris PRW2 on alles etanooli, võite tühja katseklaasi tsentrifuugimise aega pikendada 2 minutini või asetada puhastuskolonn 5 minutiks toatemperatuurile, et jääk-etanooli täielikult eemaldada.
9.Komplekti kasutati valesti.
Soovitus: polüfenoolsete polüsahhariidide taimeproovide puhul ei pruugi olla võimalik saada ideaalseid RNA proove, kasutades tavalisi komplekte, nagu Plant Total RNA Isolation Kit.Soovitame teil kasutada Plant Total RNA IsolationKit Plus, mis on spetsiaalselt loodud polüfenoolsete polüsahhariidide taimeproovide jaoks.Komplekt, mis on spetsiaalselt välja töötatud RNA ekstraheerimiseks polüfenoolide ja polüsahhariidide taimeproovidest.
OD260/OD280 väärtus on madal
RNA elueerimine ddH2O-ga ja seda kasutatakse spektrofotomeetri näitude jaoks annab madalad OD260/OD280 väärtused.Suhteliselt õigete OD260/OD280 väärtuste saamiseks soovitame kasutada 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (rnaasivaba ddH2O asemel RNA elueerimiseks), vt „RNA kontsentratsiooni ja puhastamise analüüsid” lk 19.
Puhastatud RNA laguneb
Puhastatud RNA kvaliteet on seotud selliste teguritega nagu proovide säilitamine, RNaasi saastumine ja manipuleerimine.
Tavaliste põhjuste analüüs:
1. Koeproove ei säilitatud õigeaegselt pärast kogumist.
Soovitus: Kui koeproove ei kasutata õigeaegselt pärast kogumist, hoidke neid kohe madalal temperatuuril vedelas lämmastikus või viige need pärast kiirkülmutamist vedelas lämmastikus pikaajaliseks säilitamiseks temperatuurini -80°C või kastke proovid kohe RNA stabilisaatori RNAlater lahusesse (loomaproovid).RNA ekstraheerimiseks proovige kasutada värskelt kogutud koeproove.
2.Koeproovide korduv külmutamine ja sulatamine.
Soovitus: Koeproovide säilitamisel on parem lõigata need säilitamiseks väikesteks tükkideks ja kasutamisel osa neist välja võtta, et vältida proovide korduvast külmutamisest ja sulatamisest põhjustatud RNA lagunemist.
3. Operatsiooniruumis võetakse kasutusele RNaasi või ei kanta ühekordseid kindaid, maske jne.
Soovitus: RNA ekstraheerimise katseid on kõige parem teha eraldi RNA operatsioonidena ning laborilaud tuleks enne katset puhastada ning katse ajal kanda ühekordseid kindaid ja maske, et vältida RNA degradeerumist, mis on põhjustatud RNaasi sissetoomisest suurimal määral.
4. Reaktiiv on kasutamise ajal saastunud RNaasiga.
Soovitus: Asendage seotud katsete jaoks uue taime kogu RNA ekstraheerimise komplektidega.
5. RNA-ga manipuleerimiseks kasutatud tsentrifuugitorud ja pipetiotsad on saastunud RNaasiga.
Soovitus: Veenduge, et RNA ekstraheerimisel kasutatavad tsentrifuugitorud, pipetiotsad, pipetid jne on kõik RNaasivabad.
Kasutusjuhendid:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus kasutusjuhend
