Juhised probleemide analüüsimiseks

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

RNA-d ei saa ekstraheerida või nukleiinhappe saagis on madal

Taaskasutamise tõhusust mõjutavad tavaliselt paljud tegurid, näiteks: proovi RNA sisaldus, töömeetod, elueerimismaht jne.

Tavaliste põhjuste analüüs:

1.Jäävannis või madalal temperatuuril (4 °C) tsentrifuugimine töötamise ajal.

Soovitus: Toatemperatuuril (15-25 °C) töötamine, mitte kunagi jäävanni ja madala temperatuuriga tsentrifuugi kasutamine.

2. Proovide ebaõige säilitamine või liiga kauaaegne proovide säilitamine.

Soovitus: hoida proove temperatuuril -80 °C või külmutada vedelas lämmastikus ning vältida korduvat külmutamist-sulatamist;proovige RNA ekstraheerimiseks kasutada värskelt kogutud proove.

3. Ebapiisav proovi lüüs

Soovitus: veenduge, et proov ja töölahus (lineaarne akrüülamiid) on põhjalikult segatud ja inkubeeritud 10 minutit toatemperatuuril (15-25 °C).

4.Eluent lisati valesti

Soovitus: veenduge, et puhastuskolonni membraani keskele oleks lisatud RNaasivaba ddH2O

5. Vale kogus veevaba etanooli puhvris viRW2

Soovitus: järgige juhiseid, lisage puhvrile viRW2 õige kogus veevaba etanooli ja segage need enne komplekti kasutamist korralikult läbi.

6. Näidise vale kasutamine.

Soovitus: 200 µl proovi 500 µl puhvri viRL kohta.Liigne proovimaht vähendab RNA ekstraheerimise kiirust.

7.Vale elueerimismaht või mittetäielik elueerimine.

Soovitus: Puhastuskolonni eluendi maht on 30-50μl;kui elueerimisefekt ei ole rahuldav, on soovitatav lisada eelsoojendatud RNaasivaba ddH₂O ja pikendage toatemperatuurile asetamise aega, näiteks 5-10 min

8. Puhastuskolonnis on pärast loputamist puhvris viRW2 etanooli jääk.

Soovitus: Kui pärast loputamist puhvris viRW2 ja tsentrifuugimist tühjas katsutis 2 minuti jooksul jääb etanooli alles, võib puhastuskolonni pärast tühjas katseklaasis tsentrifuugimist jätta toatemperatuurile 5 minutiks, et eemaldada täielikult järelejäänud etanool.

Puhastatud RNA molekulide lagunemine

Puhastatud RNA kvaliteet on seotud selliste teguritega nagu proovide säilitamine, RNaasi saastumine ja toimimine.

Tavaliste põhjuste analüüs:

1.Kogutud proove ei salvestatud õigeaegselt.

Soovitus: kui proovi ei kasutata õigeaegselt pärast kogumist, hoidke seda kohe temperatuuril -80 ℃ või vedelas lämmastikus.RNA molekulide ekstraheerimiseks proovige võimalusel kasutada värskelt kogutud proove.

2. Kogutud proove külmutati ja sulatati korduvalt.

Soovitus: Vältige korduvat külmutamist ja sulatamist (mitte rohkem kui üks kord) proovi kogumise ja säilitamise ajal, vastasel juhul väheneb nukleiinhappe saagis.

3. Operatsioonisaalis võeti kasutusele RNaasi või ei kantud ühekordseid kindaid, maske jms.

Soovitus: RNA molekulide ekstraheerimise katset on kõige parem teha eraldi RNA operatsiooniruumis ja katselaud puhastatakse enne katset.Katse ajal kandke ühekordselt kasutatavaid kindaid ja maske, et vältida RNaasi sissetoomisest põhjustatud RNA lagunemist.

4. Reaktiiv on kasutamise ajal saastunud RNaasiga.

Soovitus: Asendage seotud katsete jaoks uue viiruse RNA isolatsioonikomplektiga.

5. Tsentrifuugitorude, pipetiotsikute jne RNaasi saastumine. Soovitus: Veenduge, et tsentrifuugitorud, pipetiotsad ja pipetid on kõik RNaasivabad.

Puhastatud RNA molekulid mõjutasid allavoolu katseid

Puhastuskolonnis puhastatud RNA molekulid mõjutavad allavoolu katseid, kui soolaioone või valke on liiga palju, näiteks: pöördtranskriptsioon, Northern Blot jne.

1.Elueeritud RNA molekulides on allesjäänud soolaioone.

Soovitus: Veenduge, et puhvrile viRW2 on lisatud õige kogus veevaba etanooli, ja peske puhastuskolonni kaks korda vastavalt kasutusjuhendis toodud õigele tsentrifuugimiskiirusele. Kui soolaioone on veel alles, võite puhastuskolonnile lisada puhvrit viRW2 ja jätta selle 5 minutiks toatemperatuurile.Seejärel teostage tsentrifuugimine, et eemaldada soolaioonidega saastumine suurimal määral

2.Elueeritud RNA molekulides on järelejäänud etanooli

Soovitus: kui olete veendunud, et puhastuskolonnid on puhvriga viRW2 loputatud, viige läbi tühja toru tsentrifuugimine vastavalt kasutusjuhendis toodud tsentrifugaalkiirusele.Kui etanooli on veel alles, võib selle pärast tühjas katseklaasis tsentrifuugimist jätta toatemperatuurile 5 minutiks, et eemaldada kõige rohkem järelejäänud etanooli.

Kasutusjuhendid:

Viiruse RNA isolatsioonikomplekti kasutusjuhend