(96 süvendiga) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR komplekt – SYBR Green I
Kirjeldused
The(96 süvendiga) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR komplekt–SYBR Roheline Iannabainulaadne lüüsipuhvri süsteemto vabastab kiiresti RNAkultiveeritud rakustproovid RT-qPCR reaktsioonide jaoks, välistades aeganõudvad ja töömahukadRNA puhastusprotsess ja vajaliku RNA matriitsi saamiseks kulub vaid 7 minutit.The5× Direct RT Mixja2× Direct qPCR Mix-SYBRkarbis ette nähtud saab kiiresti jasaada tõhusalt reaalajas kvantitatiivseid andmeidPCR tulemused.
5× Direct RT Mix ja 2× Direct qPCR Mix-SYBR omavad tugevat inhibiitoritaluvust ning võivad kasutada testitava proovi lüsaati matriitsina tõhusa pöördtranskriptsiooni ja spetsiifilise amplifikatsiooni jaoks.Reaktiiv sisaldab Foregene ainulaadset pöördtranskriptaasi, millel on kõrge afiinsus RNA suhtes, samuti kuuma D-Taq DNA polümeraasi, dNTP-sid, MgCl2 , reaktsioonipuhver, PCR optimeerija ja stabilisaator ning seda saab kasutada koos lüüsipuhvriga proovi kiireks, hõlpsaks ja täpseks tuvastamiseks ning sellel on kõrge tundlikkus, tugev spetsiifilisus ja hea stabiilsus.
Komplekt on suunatud 96 süvendiga kultiveeritud rakkude mikrosüsteemi lüüsile ning sellel on hea ühtlus ja konsistents;komplekti komponendid pakuvad 96 lüüsireaktsiooni, 96 pöördtranskriptsiooni reaktsiooni ja 96 × 2 qPCR reaktsiooni, mis sobivad ühekordseks kasutamiseks 96-süvendilise rakuplaadiga, vältides reaktiivide korduvast avamisest, külmutamisest ja sulatamisest põhjustatud reostust ning reaktiivi jõudluse halvenemist.
Komplekti komponendid
| Komplekti koostis ( 50 μL lüüsisüsteem/20 μLRT reaktsioonisüsteem /20μL qPCR reaktsioonisüsteem) | DRT-03011 | Märkus | |
| 96T | |||
| osaI | PuhverCL | 5 ml | KamberLüüs |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| PuhverST | 500 μL | ||
| osa II | DNAKustutuskumm | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX-i võrdlusvärv | 400µL | ||
| RNaasi- TasutaddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Maastased | 1 tükk | 1 portsjon | |
*: Lüüsimisreaktiiv DNA Eraser sisaldub komplekti II osas;Rakkude lüüsi, RT ja qPCR komponente saab osta eraldi.
Omadused ja eelised
■Lihtne ja tõhus: Cell Direct RT tehnoloogiaga saab RNA proove võtta vaid 7 minutiga.
■ Valimivajadus on väike, testida saab kuni 10 rakku.
■ Suur läbilaskevõime: suudab kiiresti tuvastada RNA rakkudes, mida on kultiveeritud 384, 96, 24, 12, 6 süvendiga plaatidel.
■ DNA Eraser suudab vabanenud genoome kiiresti eemaldada, mis vähendab oluliselt mõju järgnevatele katsetulemustele.
■ Optimeeritud RT- ja qPCR-süsteem muudab kaheetapilise RT-PCR-i pöördtranskriptsiooni tõhusamaks ja PCR-i spetsiifilisemaks ning RT-qPCR-i reaktsiooni inhibiitoritele vastupidavamaks.
Komplekti rakendus
Kasutusala: kultiveeritud rakud.
- Proovi lüüsil vabanev RNA: kehtib ainult selle komplekti RT-qPCR matriitsi puhul.
- Komplekti saab kasutada järgmistel eesmärkidel: geeniekspressiooni analüüs, siRNA-vahendatud geeni vaigistava toime kontrollimine, ravimite sõelumine jne.
Ladustamine ja säilivusaeg
Selle komplekti I osa tuleks hoida 4℃;II osa tuleks hoida temperatuuril -20 ℃.
Foregene Protease Plus II tuleks hoida temperatuuril 4℃, mitte külmutada temperatuuril -20 ℃.
Reaktiiv 2×Direct qPCR Mix-Taqman tuleks hoida temperatuuril -20℃pimedas;kui seda kasutatakse sageli, võib seda säilitada ka temperatuuril 4℃ lühiajaliseks säilitamiseks (kasutada ära 10 päeva jooksul).
Reaalajas PCR praimeri kujundamise põhimõtted
Forward Primer ja Reverse Primer
Real Time PCR jaoks on praimeri disain väga oluline.Praimerid on seotud PCR amplifikatsiooni spetsiifilisuse ja efektiivsusega ning neid saab kujundada järgmiste põhimõtete alusel:
- Praimeri pikkus: 18-30 bp.
- GC sisaldus: 40-60%.
- Tm väärtus: Praimeri disainitarkvara, näiteks Primer 5, võib anda praimeri Tm väärtuse.Üles- ja allavoolu praimerite Tm väärtused peaksid olema võimalikult lähedased.Kasutada võib ka Tm arvutamise valemit: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR-i läbiviimisel valitakse tavaliselt anniilimistemperatuuriks temperatuur, mis on madalam kui praimeri Tm väärtus 5 °C (vastav anniilimistemperatuuri tõus võib suurendada PCR-reaktsiooni spetsiifilisust).
- Praimerid ja PCR-tooted:
- Disainpraimeri PCR amplifikatsiooniprodukti pikkus on eelistatavalt 100-150 bp.
- Kujunduskruntide kasutamist malli teiseses struktuuripiirkonnas tuleks võimalikult palju vältida.
- Vältige 2 või enama komplementaarse aluse moodustumist ülesvoolu ja allavoolu praimerite 3'-otste vahel.
- Krundi 3′ klemmipõhja ei saa olla koos 3 täiendava järjestikuse G või C-ga.
- Praimeritel endil ei saa olla komplementaarseid struktuure, vastasel juhul moodustub juuksenõelastruktuur, mis mõjutab PCR amplifikatsiooni.
- ATCG tuleks praimeri järjestuses jaotada võimalikult ühtlaselt ja 3'-terminaalset alust tuleks vältida kui T.
Lisa1:Cell OtseneRT-qPCR Komplekti komponentt lisapakk
1. Rakkude lüüsi lahus
| Rakkude lüüsi lahus | |||
| Komplekti komponendid (24 süvendiga lüüsisüsteem / kaev) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| osaI | Puhver CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puhver ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| osaII | DNA kustutuskumm | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Komplekti komponendid (20 μl reaktsioonisüsteem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNaasivaba ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR segu | ||
| Komplekti komponendid (20 μl reaktsioonisüsteem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX-i võrdlusvärv | 40 μl | 200 μl |
| RNaasivaba ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Kasutusjuhendid:
