Laboratoorsed testid algavad proovide kogumisega ja proovide võtmisest on kõige lihtsam tähelepanuta jätta.Proovide kogumisel on kõige olulisem valida õige proovitüüp, kasutada sobivaid proovivõtuvahendeid ning teostada mõistlik transport ja töötlemine.

I. Proovi tüüp

Levinud proovitüübid on järgmised:

Proovivõtumeetod võib viidata uue koroonaviiruse keskkonnaseire tehnilistele spetsifikatsioonidele põllumajanduskaubanduse (bazaari) turul”:

1. Tampooniproovid kurgutampoonidelt, kätelt, riietelt ja muudelt praktikute esemetelt: viiruse proovivõtutorus on vaja kasutada viiruse säilituslahust ja infiltreeruda täielikult proovivõtu vatitupsudesse.Maapind) kantakse korduvalt peale ja loputatakse rohkem kui 3 korda.Samal ajal on vaja teostada proovivõtu objekti pinnal mitmepunktiline hajutatud proovivõtt.

2. Toidupinna tampooniproovid: toiduproove ei saa otse koguda.Kogutav toit tuleb enne tampooniproovide võtmist hoolikalt eraldada ja hoida puhtas proovivõtukotis.Pärast proovivõtu vatitiku täielikku leotamist on vaja kasutada viiruse säilituslahust viiruse proovivõtutorus, et kogutava toiduproovi pinda korduvalt määrida ja loputada rohkem kui 3 korda.Samal ajal on vaja teha proovipinnal mitmepunktiline hajutatud proovivõtt.

3. Reoveeproovid: Vastavalt drenaažisüsteemi jaotusele turul valige 2-3 reovee proovivõtukohta, keskendudes sisemisele toruvõrgu kogumisele, veevoolu suuna allavoolule või ühendusele kommunaaltorustikuga.Tampooniproovi kogumiseks kastke see proovivõtuvatitikuga kanalisatsiooni, et see reovett absorbeeriks, ja loputage proovivõtturis rohkem kui 3 korda.Reoveeproovide kogumiseks kasutage 30-500 ml reoveeproovide kogumiseks polüetüleenist plastpudeleid;reovee kogumiseks mahuga üle 500 ml võib kasutada polüetüleenplastist ämbreid või kohapeal veeproovi võtmiseks spetsiaalseid rikastusseadmeid.Samal ajal on reovee proovivõtukoha jaoks vaja läbi viia mitmepunktiline hajutatud proovide võtmine.

4. Loomaproovid: elusloomade puhul saab proovivõtuproove kasutada kehapinna tampoonide, orofarüngeaalsete ja pärakuproovide kogumiseks, samuti saab koguda väljaheidete või eritiste proove ja need vastavalt salvestuslehele registreerida.Loomade proovide puhul, mis on läbinud nülgimise vms, kasutage nende kehapinna ja kehaõõnsuse tampooniproovide kogumiseks vatitampooni.Proovivõtu vatitupsu täielikuks imbumiseks tuleb kasutada viiruse säilituslahust viiruse proovivõtutorus ja seejärel korrata kogutava toiduproovi pinna pealekandmist.Shabu rohkem kui 3 korda.Samal ajal on vaja teha proovipinnal mitmepunktiline hajutatud proovivõtt.

5. Muud seadmed: konteinerid loomade transportimiseks ja aretamiseks, näiteks puurid või kalapaagid.Esmalt jälgige või mõistke konteineris hoitavate ja kasvatatavate loomade konkreetseid tüüpe ning võtke konteineri siseseinalt tampooniproovid või sisust vedelikuproovid.

6. Koguge aerosooliproove inimeste kogunemiskohtadest, halvasti ventileeritavatest kohalikest kaubanduspiirkondadest, kontoritest ja puhkeruumidest.

II.Proovivõtuvahendid
1. Verevõtutoru
Kui hiljem on vaja teha nukleiinhapete analüüs ja antikoagulantide proove, on vere kogumiseks soovitatav kasutada EDTA antikoagulanti sisaldavat vaakumveresoont;seerumiproovide jaoks on soovitatav kasutada vaakumveresoont ilma antikoagulandita.

2. Proovivõtu tampoon

Kaltsiumalginaadist tampooni või puitvarrastega tampooni asemel on soovitatav kasutada polüpropüleenist tampooni, sest need võivad sisaldada aineid, mis inaktiveerivad teatud viiruseid ja pärsivad PCR-testi.Puuvillapeadega tampoone ei saa kasutada, kuna puuvillakiud adsorbeerivad tugevalt valku ja neid ei elueerita kergesti järgnevasse säilituslahusesse.

„10-ühes uute koronaviiruse nukleiinhapete segakogumise ja tuvastamise tehnilistes kirjeldustes” on selgelt sätestatud, et „proovivõtu tampoon peab olema valmistatud polüestrist, nailonist ja muudest mittepuuvillasetest ja kaltsiumalginaatmaterjalidest ning käepide peab olema mittepuidust materjalist.Murdepunkt on umbes 3 cm kaugusel tampoonipea ülaosast, mida on lihtne murda.

Ameerika Ühendriikide CDC mainis ka: „Kasutage ainult sünteetilisest kiust tampooni, millel on plast- või traatvõll.Ärge kasutage kaltsiumalginaadist tampooni ega puidust varrega tampoone,kuna need võivad sisaldada aineid, mis inaktiveerivad mõningaid viirusi ja pärsivad PCR-testi.

Praegu kasutatakse laialdaselt ühekordselt kasutatavat steriilset nailonist flokeerivat tampooni, mis on kombineeritud plastvardaga.Flokeerival tampoonil on parem veeimavus ja eraldumise kiirus.Vastavalt erinevatele proovivõtukohtadele on ka tampoonipea erineva suuruse ja kiududega.Paksus.”

3. Transpordi säilitamise lahenduse näidis

Viiruse inaktiveerimise säilituslahus: sobiv kogus guanidiinisoola kontsentratsiooni ja mitmesugused viiruse lüüsikomponendid võivad viirust otse lüüsida, vabastades nukleiinhappe, inaktiveerides RNaasi ja DNaasi ning kindlustades nukleiinhappe terviklikkuse, mida saab kasutada järgnevaks qPCR tuvastamiseks.Seda ei saa kasutada viiruse kasvatamiseks ja isoleerimiseks.

Viiruse transpordi- ja säilituslahus: sisaldab viiruse ellujäämiseks vajalikke sooli, aminohappeid, vitamiine, glükoosi ja valku, mis suudavad säilitada viiruse aktiivsust.Seda saab edaspidi kasutada nukleiinhapete ekstraheerimiseks ja viiruse tuvastamiseks ning seda saab kasutada ka viiruse kasvatamiseks ja eraldamiseks.

4. Proovide säilitustoru ja proovikott

Proovi säilitamise katsut peaks olema keeratava korgiga steriilne plasttoru, mis ei adsorbeeri nukleiinhapet.Iga proovitoru tuleks katta proovikotiga, et vältida proovi lekkimist ja saastumist.

III.Proovis esinevad segavad ained

Segavad ained PCR-katsetes

1. endogeenne interferents

Kehaproovis sisalduvad ained võivad segada teiste ainete tuvastamist.

Veri:heem (>1mg/ml), hemiin (>0,1ng/μl), triglütseriidid, IgG jne;

Uriin:uurea (20 mM);

Väljaheide:taimsed polüsahhariidid, kolaat;

Pabertaskurätik:proteaas, kollageen;

Piim: proteaas, kaltsiumiioon;

Narkootikumid: antibiootikumid, viirusevastased ravimid, hormoonid jne.

muud.

2. eksogeenne interferents

See pärineb ainetest, mis võivad segada teiste ainete in vitro tuvastamist.Proovide lisandid ja ained, millega võib proovide võtmise ja töötlemise ajal kokku puutuda:

Testi tarvikud: seerumi eraldusgeel, proovide kogumise konteiner ja kummikork, kateeter, kateetri loputusvedelik, kindapulber jne.

Antikoagulant: hepariin (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM) jne;

Orgaanilised lahustid: isopropanool (>0,1 IU/ml), betaiin, dimetüülsulfoksiid, formamiid, glütseriin, PEG jne;

Desinfektsioonivahendid: alkoholid (etanool>1%), aldehüüdid, fenoolid (fenool>0,2%), peroksiidid, tugevad happed (HCL), tugevad leelised (NaOH) jne;

Pesuaine:SDS (>0,005%);

Muld: Huumus

Värvaine: Indigo

muud.

Tegelikes välitingimustes proovivõtutingimustes, näiteks keskkonnaproovide kogumisel, võivad proovid sisaldada mitmesuguseid segavaid aineid ja igas asukohas on segavate ainete koostis erinev, mistõttu tuleb PCR-i interferentskatsed läbi viia vastavalt kohalikele tingimustele.

IV.Näidiste säilitus- ja transporditingimused

Värskelt kogutud kliinilised proovid tuleb saata laborisse 2–4 tunni jooksul pärast kogumist temperatuuril 2°C kuni 8°C.Hoida temperatuuril 4 ℃ 24 tunni jooksul.Viiruse isoleerimiseks ja nukleiinhapete tuvastamiseks kasutatud proove tuleks testida niipea kui võimalik.Proove, mida saab testida 24 tunni jooksul, võib säilitada temperatuuril 4°C;proove, mida ei ole võimalik 24 tunni jooksul tuvastada, tuleb hoida temperatuuril -70°C või madalamal (kui mitte - Hoida temperatuuril 70°C külmkapis temperatuuril -20°C).

Kokkuvõte:Proovide standardne kogumine, transportimine ja ladustamine on hilisemaks testimiseks hädavajalik.Paljude laborianalüüside valenegatiivsed tulemused on põhjustatud proovide ebaõigest kogumisest, transportimisest ja säilitamisest, mis põhjustab viiruse nukleiinhappe lagunemist.Paljud laborid aga eiravad ikka veel proovide võtmise tähtsust.Loodan, et see artikkel äratab kõigis tähelepanu proovivõtule ning muudab proovide võtmise teaduslikumaks ja mõistlikumaks!

Seotud toode:

SARS-CoV-2 variandi nukleiinhappe tuvastamise komplekt (I) (multipleksne PCR-i fluorestsentssondi meetod) – Brasiiliast, Lõuna-Aafrikast ja Ühendkuningriigist pärit mutantide tuvastamiseks