Kuumkäivitusega Taq ensüümi kasutatakse laialdaselt.Võrreldes tavalise DNA polümeraasiga võib kuumkäivitusega Taq ensüüm tõhusalt vältida mõnda mittespetsiifilist amplifikatsiooni ja praimeri dimeeride moodustumist ning võib tõhusalt parandada sihtgeeni amplifikatsiooni edukust.Eelkõige geneetilise testimise valdkonnas on kuumkäivitusega Taq ensüüm tunnistatud tööstuses kohustuslikuks standardiks ja tavalist DNA polümeraasi ei tohiks kasutada.Nagu ülaltoodust näha, kasutatakse kuumkäivitusega Taq ensüüme laialdaselt.Praegu on siseturul palju kuumkäivitusega Taq ensüümide kaubamärke, kuid kvaliteetseid kuumkäivitusega Taq ensüüme pole palju.Kui seisame silmitsi nii paljude kiirkäivitusega Taqi ensüümtoodetega, kuidas peaksime valima?

1. Valige kõrge amplifikatsioonitõhususega kuumkäivitusega Taq ensüüm

PCR amplifikatsiooni efektiivsus on tihedalt seotud Taq ensüümi jõudlusega.Pärast hea Taq ensüümi reaktsioonisüsteemi optimeerimist on amplifikatsiooni efektiivsus üle 95% ja algse matriitsi koguse amplifikatsioonivahemik on lai.Rahuldava amplifikatsiooni on võimalik saavutada, kui sihtgeeni sisaldus on madal, ja kui matriitsi kogus on suur ja eksponentsiaalne amplifikatsiooniperiood on pikk, ei ole lihtne mürgitada.Halva jõudlusega Taq ensüümi puhul on isegi siis, kui reaktsioonisüsteemi on mitu korda optimeeritud, amplifikatsiooni efektiivsus ikkagi alla 90%, amplifikatsioonikõvera S-kuju ei ole ilmne, kalle on väike ja kõver on tasane.Kui malli kogus on väike, ei saa seda võimendada ja kui malli kogus on suur, pole võimendusefekt ideaalne.Seetõttu on kõrge amplifikatsioonitõhususega DNA polümeraaside valik PCR ja qPCR edu jaoks ülioluline.

2. Valige tugeva ensüümivõimsusega kuumkäivitusega Taq ensüüm

Taq ensüümi ensümaatiline võimsus on seotud amplifikatsiooni efektiivsusega.Üldiselt, mida tugevam on kuumkäivitusega Taq ensüümi ensümaatiline võimsus, seda pikem on PCR amplifikatsiooni eksponentsiaalne kasvuperiood, seda tüüpilisem on S-kujuline kõver, seda kõrgem on fluorestsentssignaali väärtus ja seda sobivam on multipleks PCR tuvastamiseks.Nõrga ensümaatilise võimsusega kaubamärgi-DNA polümeraasid suudavad üldiselt toetada ainult 2-pleksreaktsioone.3-pleksreaktsioonide tegemisel on võimenduskõver madal, fluorestsentssignaali väärtus madal ja tüüpiline võimenduskõver puudub, mistõttu tulemusi on raske hinnata.

3. Valige kõrge tundlikkusega kuumkäivitusega Taq ensüüm

Üldiselt on DNA polümeraasil kõrge amplifikatsioonitõhusus ja kõrge tundlikkus, kuid esineb ka ebakõlasid.Kui amplifitseeritava proovi sihtgeenide arvukus on madal, on soovitatav testida Taq ensüümi amplifikatsioonitundlikkust.Kõige tavalisem tuvastamismeetod on sihtgeeni plasmiidi fragmendi 10- või 5-kordne gradientlahjendus, PCR-i tuvastamine madalama lahjenduse juures ja kõrgema tuvastamistundlikkusega kuumkäivitusega Taq-ensüümi valimine.

Eelnevast on näha, et teadlastel tuleb valida vastavalt oma katsenõuetele ja rahastamistingimustele.Kuumkäivitusega Taq ensüümi võimenduse efektiivsuse ja tundlikkuse tuvastamiseks on kõige parem teha gradientlahjenduse amplifikatsioonikatse.

Foregene näide's Taq DNA polümeraas:

Foreasy HS Taq DNA polümeraas

Kirjeldus

Foreasy HS Taq DNA polümeraas on DNA polümeraas, mida ekspresseeritakse Escherichia coli inseneribakterites geenirekombinatsiooni tehnoloogia abil.Ensüüm on kombineeritud ainulaadse reaktsioonipuhvriga, mis muudab toote väga vastupidavaks ja ühilduvaks ning võib kasutada proovilüsaati (Foregene Lysis süsteem) otse tuvastamisreaktsioonide mallina.

Rakendus

Puhastatud ja puhastamata mallide kvalitatiivne PCR ja kvantitatiivne PCR tuvastamine.

Kvaliteedi kontroll

1. Eksogeenset nukleaasi aktiivsust ei tuvastatud

2. PCR meetod genoomse jääk-DNA tuvastamiseks ilma peremeesorganismita

3. See võib tõhusalt amplifitseerida ühe koopiaga geene inimese genoomis

4. Hoida toatemperatuuril nädal aega, ilma nähtavate aktiivsuse muutusteta

Toote üksikasjad: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/