PCR sünd
PCR (polümeraasi ahelreaktsioon)
Polümeraasi ahelreaktsiooni leiutamisest on möödunud üle 30 aasta.Rohkem kui 30 aastat, pärast seda, kui paljud teadlased üle maailma jätkavad täiendamist ja täiustamist, on PCR-tehnoloogia muutunud kõige laialdasemalt ja sagedamini kasutatavaks ning kõige olulisemaks alusuuringute meetodiks kogu bioteaduste valdkonnas.
Traditsioonilise PCR-tehnoloogia laialdase kasutuse põhjal välja töötatud TouchDown PCR, Real-Time PCR, Multi PCR jne, samuti äsja ilmunud digitaalne PCR (digitaalne PCR) on oluliselt rikastanud enamiku teadlaste uurimismeetodeid ja kiirendanud oluliselt kaasaegsete bioteaduste, eriti molekulaarbioloogia arendusprotsessi, on andnud suure panuse kogu inimkonna elu ja olemuse uurimisse.
Traditsioonilise PCR-tehnoloogia defektid
Kompleksne nukleiinhapete eraldamine jaekstraheerimine:
★ Traditsiooniline PCR-tehnoloogia: nõutav
★ PCR-ist tuletatud tehnoloogia: nõutav
★ DNA ja RNA proovid: suured erinevused, keerulised toimimisnõuded
★ Ohud kehale: mürgised reaktiivid kahjustavad keha
Traditsioonilise PCR-tehnoloogia ja derivaattehnoloogia eeltingimuseks on nukleiinhapete eraldamine ja puhastamine
Iga bioloogiline proov peab PCR-tehnoloogia nõuetele vastavate nukleiinhappeproovide saamiseks läbima mitmeid keerulisi ja tüütuid proovitöötlusi.
DNA ja RNA eraldamine ja ekstraheerimine on alati olnud põhiülesanne, mida vastavad teadlased peavad iga päev kordama.
Proovide tohutute erinevuste tõttu on ka DNA ja RNA eraldamis- ja ekstraheerimisprotsessid väga erinevad.See töö nõuab operaatoritelt kõrget tehnilist oskust.Traditsioonilised eraldamis- ja ekstraheerimismeetodid nõuavad pikaajalist kokkupuudet väga mürgiste keemiliste reaktiividega.See põhjustab pöördumatuid kahjustusi operaatori kehale ja isegi otseseid kahjustusi katse ajal.
Samal ajal on nende jaoks, kellel on uurimiseks suur hulk proove, nukleiinhapete eraldamine ja ekstraheerimine töömahukas ülesanne.
Turul olevad nukleiinhapete eraldamise ja ekstraheerimise komplektid on nüüdseks küpsed ja kaubamärke on palju, kuid need on ligikaudu samad.Olenemata sellest, kas tegemist on silikageeli membraankolonni tsentrifugaalkomplektiga või magnethelmeste meetodiga, võtab see palju aega ja on kulukas.Lisaks komplekti maksumusele on erinõuded ka laboriseadmetele.Magnethelmeste meetodil kasutatav automatiseeritud tööjaam on väga tüüpiline suuremahuline suure väärtusega aparatuur, mis on laborile tohutu väljaminek.
Kokkuvõttes
Enne PCR-katsete läbiviimist on proovide eeltöötlemine teadlastele paratamatu ja alati peavalu valmistav.Kuidas seda probleemi lahendada ja kas PCR-katseid saab läbi viia ilma nukleiinhapete eraldamise ja ekstraheerimiseta, on alati olnud enamik teadlastest ja kliiniliste laborite töötajatest mõelnud.
Foregene'i lahendus
Pärast aastaid kestnud põhjalikku uurimistööd Direct PCR tehnoloogia ja sellega seotud komplektide alal murdis Forgene edukalt läbi paljudest kitsaskohtadest ja saavutas edukalt otsese PCR paljude erinevate proovide jaoks, millel on tugev vastupidavus ja kohanemisvõime, võimaldades teadlastel vabaneda tülikast ja ohtlikust nukleiinhapete eraldamisest ja ekstraheerimisest.See vähendab oluliselt igaühe töömahukust, kiirendab katseprotsessi ning säästab teadusuuringute ja katsetuste kulusid.
Forgene'i mõistmine ja teadmised DirectPCR-ist
Esiteks on DirectPCR-tehnoloogia otsene PCR-tehnoloogia erinevate bioloogiliste proovide kudede jaoks.Selles tehnilises seisukorras puudub vajadus nukleiinhapete eraldamiseks ja ekstraheerimiseks ning koeproovi kasutatakse otse objektina ning PCR reaktsiooni jaoks lisatakse sihtgeeni praimerid.
Teiseks, DirectPCR-tehnoloogia ei ole mitte ainult traditsiooniline DNA matriitsi amplifikatsioonitehnoloogia, vaid hõlmab ka RNA matriitsi pöördtranskriptsiooni PCR-i.
Kolmandaks, DirectPCR-tehnoloogia ei teosta mitte ainult otseselt koeproovidega rutiinseid kvalitatiivseid PCR-reaktsioone, vaid hõlmab ka reaalajas qPCR-reaktsioone, mis nõuavad, et reaktsioonisüsteemil oleks tugev võime seista vastu taustafluorestsentsi häiretele ja antagoniseerida endogeenseid fluorestsentsi kustutajaid.
Neljandaks, DirectPCR-tehnoloogiaga sihitud koeproovid nõuavad ainult nukleiinhappemallide vabastamist ja ei eemalda valke, polüsahhariide, soolaioone jne, mis segavad PCR reaktsiooni.See eeldab, et nukleiinhappe polümeraasil ja PCR-i segul reaktsioonisüsteemis on suurepärane pöörduvusvastane ja kohanemisvõime ning need võivad tagada ensüümi aktiivsuse ja replikatsiooni täpsuse keerulistes tingimustes.
Viiendaks, DirectPCR-tehnoloogiaga sihitud koeproove ei ole nukleiinhappega rikastatud ja matriitsi kogus on väga väike, mis nõuab reaktsioonisüsteemi äärmiselt kõrget tundlikkust ja amplifikatsiooni efektiivsust.
Järeldus
DirectPCR-tehnoloogia on üks olulisemaid tehnoloogilisi arenguid ja uuendusi viimase 30 aasta jooksul alates PCR-tehnoloogia sünnist.Forgene on ja jääb selle tehnoloogia teerajajaks ja uuendajaks.
DirectPCR-tehnoloogia rakendusvõimalused on väga laiad.Selle tehnoloogia pidev täiustamine ja edendamine toob kindlasti kaasa õõnestavaid muudatusi teadusuuringutes ja inspekteerimistöös.See on PCR-tehnoloogia revolutsioon.
Postitusaeg: 21. veebruar 2017
