Plii

Pikk mittekodeeriv RNA, lncRNA on mittekodeeriv RNA, mille pikkus on üle 200 nukleotiidi, tavaliselt vahemikus 200-100000 nt.lncRNA reguleerib geeniekspressiooni epigeneetilisel, transkriptsiooni ja transkriptsioonijärgsel tasemel ning osaleb X-kromosoomi vaigistamises, genoomi jäljendamises ja kromatiini muutmises, transkriptsiooni aktiveerimises, transkriptsiooni häiretes, tuumatranspordis, rakutsükli reguleerimises, rakkude diferentseerumise reguleerimises ja doosi kompenseerimises (Doosiga seotud kompensatsiooniprotsessid on praegu seotud inimeste haiguste ennetamisega ja paljude teiste haigustega) biomeditsiini valdkonna kuumad kohad.

01  LncRNA tüübid ja omadused

LncRNA jaguneb mitmeteks tüüpideks vastavalt selle moodustumise erinevatele allikatele, nagu on näidatud ülaltoodud joonisel.Sellel on järgmised omadused:

1. lncRNA-d on tavaliselt pikemad, dünaamilise ekspressiooni ja erinevate splaissimismeetoditega diferentseerumisel
2. Võrreldes kodeerivate geenidega on lncRNA ekspressioonitase tavaliselt madalam
3. Enamikul lncRNA-del on koe diferentseerumise ja arengu protsessis ilmne ajaline ja ruumiline ekspressioonispetsiifilisus
4. Kasvajatel ja muudel haigustel on iseloomulikud väljendid
5. LncRNA subtsellulaarsed asukohad on mitmekesised
6. Jada on madala säilivusastmega, kuid funktsioonil on teatud säilivusaste jne.

02 Korduma kippuvad küsimused LncRNA pöördtranskriptsiooni kohta

Rakkude vähese lncRNA sisalduse, pika pikkuse ja kõrgetasemelise struktuuri tõttu on sellisel RNA-l sageli keerulised struktuurid, nagu varresilmused või juuksenõelad, ning RT-qPCR on altid ebaõnnestunud pöördtranskriptsiooni või madala efektiivsusega seotud probleemidele.

03 LncRNA pöördtranskriptsiooni lahus

Põhireegli kohaselt nimetatakse pöördtranskriptsiooniks protsessi, kus RNA viirused kasutavad DNA sünteesimiseks oma pöördtranskriptaasi, kasutades RNA-d matriitsina.RNA viiruse pöördtranskriptaasi kasutamist cDNA matriitsi in vitro sünteesimiseks nimetatakse pöördtranskriptsiooniks.Peamised pöördtranskriptsioonisüsteemi kuuluvad elemendid: RNA matriits, pöördtranskriptaas, praimerid ja muud komponendid.

1.RNA matriits

RNA matriitsi mõju pöördtranskriptsioonile kajastub selle struktuuris, puhtuses ja terviklikkuses.Mida kõrgem on ekstraheeritud RNA puhtus ja terviklikkus, seda suurem on pöördtranskriptsiooni efektiivsus ja täpsemad on hilisemad kvantitatiivsed tulemused.Tavaliselt kasutatavate RNA ekstraheerimisreagentidega puhastatud RNA sisaldab sageli alkoholi ja guanidiini soolade jääke, millel on tugev pärssiv toime enamikule pöördtranskriptaasidest.

2. Pöördtranskriptaas

Pöördtranskriptaasil on oluline mõju kogu pöördtranskriptsioonisüsteemile.Enamikus laborites kasutatava pöördtranskriptaasi sobiv temperatuur on üldiselt 42 °C.Tegelikult nõuab kõrgetasemelise RNA struktuuri avamine kõrgemat temperatuuri ja nõuded pöördtranskriptaasile on kõrgemad.

3.Kruntvärv

Pöördtranskriptsiooni praimerid hõlmavad geenispetsiifilisi praimereid, juhuslikke praimereid ja Oligo dT praimereid.Enamik lncRNA-sid ei sisalda polüA sabasid ja oluline on juhuslikud praimerid õigesti sobitada Oligo dT-ga.

4.Muud komponendid

Arvestades asjaolu, et RNA-d on eriti lihtne lagundada, saab pöördtranskriptsioonisüsteemi komponentide sisseviimist minimeerida, mis võib tõhusalt takistada RNaasi sisenemist ja tagada pöördtranskriptsiooni sujuva edenemise.

Foreensaab RNA matriitsist pöördtranskriptsiooni qPCR-ks

Saate igakülgselt oma lncRNA tuvastamist

Looma kogu-RNA IlohutusKomplekt (koos gDNA eemaldamise kolonniga)

Raku kogu RNA IlohutusKomplekt (koos gDNA eemaldamise kolonniga)

Lnc-RT HeroTM I (gDNaasiga) (Super eelsegu esimese ahela cDNA sünteesiks lncRNA-st)

Reaalajas PCR EasyTM-SYBR Green I

Aeelised ofRNA ekstraheerimine:

Komplektis kasutatakse kolmanda põlvkonna RNA ekstraheerimise tehnoloogiat, DNaasi pole vaja kasutada.

11 minutit 96, 24, 12 ja 6 süvendiga plaadil kultiveeritud rakkudest, gDNA-vaba, kõrge puhtusastmega ja kvaliteetse raku kogu-RNA ülitõhus ekstraheerimine.

LncRNA pöördtranskriptsiooni eelised:

Spetsiaalselt LncRNA jaoks välja töötatud pöördtranskriptsioonisüsteem genoomse DNA saastumise kiireks eemaldamiseks.

Pöördtranskriptsioonisüsteemil on kõrge termiline stabiilsus ja sellel on siiski hea pöördtranskriptsiooni jõudlus temperatuuril 50 °C.

Suure GC-sisaldusega ja keerulise sekundaarse struktuuriga malle saab suure tõhususega ümber pöörata.

Eelisedof qPCR:

Kuumkäivitusel Foregene Taq Polymerase'il on kõrgem amplifikatsioonitõhusus, suurem amplifikatsioonitundlikkus ja kõrgem võimendamise spetsiifilisus

Optimeeritud Real PCR Easy Mix muudab SYBR Green I tuvastamistundlikkuse kõrgemaks ja selle fluorestsentsi intensiivsus on 3–5 korda suurem kui sarnastel toodetel, mis vastavad erinevat tüüpi fluorestsentsi kvantitatiivsete katsete vajadustele.