W:Brother, pöördtranskriptsioon on lõpetatud ja lõpuks viimane samm – fluorestsents-kvantitatiivne PCR!Hei, vend, mis on reaalajas kvantitatiivne PCR?
M: PCR sa tead alati, eks?
W: Tead, PCR on polümeraasi ahelreaktsioon ja see on tehnoloogia, mis suurendab DNA-d!
M: See on peaaegu… See on tehniline meetod sihtjärjestuse võimendamiseks rohkem kui miljon korda läbi spetsiifiliste praimerite, kuid see näitab ainult sihtjärjestuse olemasolu või puudumist ega saa määrata esialgse malli kogust.Fluorestsents-kvantitatiivne PCR on selle probleemi lahendamiseks välja töötatud tehniline meetod.Reaalajas PCR ja koguse PCR (qPCR) viitavad sellele üldiselt.
W: Erinevus tavalisest PCR-ist seisneb fluorestsentsi kvantifitseerimises?
M: Jah, see tähendab, et iga PCR-tsükli pikendamisetapis tuvastatakse fluorestsentssignaali intensiivsus ja algse malli koguse saab arvutada vastavalt signaali intensiivsuse muutusele.
W: See tundub nii keeruline!Kas ma pean selle ise arvutama?
M: See nõuab aeglaselt õppimist, kõige parem on põhimõttest aru saada.Nüüd saate esmalt keskenduda CT väärtusele, mis on suhteliselt intuitiivne eksperimentaalne teave ja selle suurus vastab malli esialgse summa suurusele.Samuti on olemas sellised graafikud nagu võimenduskõverad ja sulamiskõverad.Neil on viimane sõna selle üle, kas teie katse õnnestub või mitte.
W: Oh, vend.Siis ma teen qPCR katse!
M: Pöörake erilist tähelepanu, et mitte lisada reaktiivialale malle, vastasel juhul saastub teie kasutamata segu kergesti!
W: Sain aru!

Reaalajas PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I komplekt

Suurem efektiivsus, suurem spetsiifilisus
Kõrge tundlikkus, hea ühilduvus