• facebook
  • linkedin
  • Youtube

A260/A230 madal suhe on tavaliselt põhjustatud lisanditest, mille maksimaalne neeldumislainepikkus on 230 nm juures.Vaatame, mida need lisandid sisaldavad:

  • Levinud saasteained

    Absorptsiooni lainepikkus

    Suhteefekt

    Valk

    ~230nm ja 280nm

    Samaaegne A vähendamine260/A 280ja A260/A 280suhted

    Guanidiini sool

    220-240 nm

    Vähendage A260/A 280suhe

    fenool

    ~270nm

    -

    Trizol

    ~230nm ja 270nm

    Vähendage A260/A 280suhe

    EDTA

    ~230nm

    Vähendage A260/A 280suhe

    Etanool

    230-240 nm

    Vähendage A260/A 280suhe

 
 
 
Tavaliste saasteainete neeldumise lainepikkus ja kontrasti väärtus

Proteiini saastumine
Valgureostust võib pidada kõige levinumaks reostuseks nukleiinhapete ekstraheerimise protsessis.Valk eksisteerib ülemise vesifaasi ja alumise faasi vahelorgaanilinefaas .Reostus vähendab samal ajal A260/A280 ja A260/A230 suhet ning A260/A230 suhe muutub ilmsemalt kui A260/A280 suhe.
Järgnevatelpöördtranskriptsioonor qPCR reaktsioonid, valgujäägid võivad ensüümi funktsiooni pärssida või häirida.Parim viis valkudega saastumise vältimiseks on supernatandi aspireerimisel meeles pidada põhimõtet "pigem vähem kui rohkem, mitu korda väike kogus".

2. Guanidiiniumi reostus
vesinikkloriid (GuHCl) ja guanidiintiotsüanaat (GTC) omavad valke denatureerivat toimet, mis võivad nukleiinhappe ekstraheerimise käigus kiiresti rakumembraane hävitada, põhjustades valkude denatureerumist ja sadenemist.GuHCl ja GTC neeldumislainepikkus on vahemikus 220–240 nm jaguanidiinisoola jääk vähendab A260/A230 suhet.Kuigi guanidiinisoola jääk vähendab suhet,mõju allavoolu katsetele on tegelikult tühine.

3. Trizoli saastumine
Trizoli põhikomponent on fenool.Fenooli põhiülesanne on rakkude lüüsimine ning valkude ja nukleiinhappeainete vabastamine rakkudes.Kuigi fenool võib valke tõhusalt denatureerida, ei saa see täielikult inhibeerida RNaasi aktiivsust.Seetõttu lisatakse TRIzolile endogeense ja eksogeense RNaasi inhibeerimiseks 8-hüdroksükinoliini, guanidiini isotiotsüanaati, β-merkaptoetanooli jne.
Rakulise RNA ekstraheerimisel suudab Trizol rakke kiiresti lüüsida ja inhibeerida rakkudest vabanevat nukleaasi ning Trizoli jääk vähendab oluliselt A260/A230 suhet.
Töötlemismeetod: Tsentrifuugimisel tuleb arvestada, et Trizolis sisalduv fenool lahustub kergesti veefaasis temperatuuril 4° ja toatemperatuuril.

4. Etanooli jääk
Etanooli kasutatakse lõppprotsessis DNA sadestamiseks, lahustades samal ajal soolaioonid, mis võivad olla seotud DNA-ga.Kõrgeima neeldumise lainepikkusimendumise tippetanool on samuti 230-240 nm juures, misvähendab ka A260/A230 suhet.
Etanoolijääkide vältimise meetodit võib viimase elueerimise ajal korrata kaks korda, puhudes sissetõmbekappkaks minutit, et etanool saaks enne elueerimiseks puhvri lisamist täielikult aurustuda.
Siiski tuleks teada, et suhe on ainult RNA kvaliteedi hindamisindeks.Kui ülalnimetatud toimingud on rangelt reguleeritud, ei avalda hälve suhte ja standardvahemiku vahel allavoolu katsetele suurt mõju.
Seotud tooted:
Animal Total RNA isolation kit
Plant Total RNA isolation kit
Cell Total RNA isolation kit
Plant Total RNA isolatsioonikomplekt Plus


Postitusaeg: 10.02.2023