Kui palju sa tead

N kohtaukleiinhappe ekstraheerimine

Puhastatud nukleiinhappe algus ja lõpp

Kõik on alguses raske, puhastatud nukleiinhapet on kõige rohkem

Molekulaarsete katsete algatamine järgmisteks katseteks

Edul või ebaõnnestumisel on otsustav mõju.

Trace/ultra-trace UV spektrofotomeeter on paljude teadusteadlaste poolt eelistatud, kuna see suudab tuvastada nukleiinhapete kontsentratsiooni ning valgu- ja soolaioonide jääke lihtsalt, kiiresti ja ökonoomselt.

Nagu me kõik teame, tähendab A260 nukleiinhappe neeldumise OD väärtust, A280 tähendab valgu kontsentratsiooni neeldumise OD väärtust, A230 tähendab soola ioonide kontsentratsiooni neeldumise OD väärtust, nii et A260 võib teisendada nukleiinhappe kontsentratsiooni, A260/280 tähendab valgujääki, A260/230 tähendab soola iooni jääki, kuid see on suur hulk mõõtmistulemustest, mis põhineb reeglil, kuid see on teadlaste poolt leitud.tavapärane” uskuda, et see võib seletada DNA ja RNA puhtustteatud määral.See ei ole ainus standard nukleiinhapete saagise ja puhtuse tuvastamiseks, seda kasutatakse ainult võrdlusalusena ja see ei ole "kuldstandard".

Thermo Fisher ND-2000 käsiraamat rõhutab testitulemuste usaldusväärsust

Põhjus on selles, et mikro/ultramikro UV-spektrofotomeetriga saadud tulemused kajastavad nukleiinhappe saagist ja puhtust ainult küljelt ning mõjutegureid (optiline tee, proovi maht, proovi kontsentratsioon, pH väärtus, muud neeldumise mõõtmist mõjutavad ioonid jne) on palju, mõõdetud OD väärtus ei pruugi olla täpne.Samal ajal on neeldumisväärtuse määramise materjali spetsiifilisuse puudumise tõttu üheahelalisel DNA-l, kaheahelalisel DNA-l, RNA-l, dNTP-del ja mõnedel valkudel kõigil neeldumispiigid 260 nm lainepikkusel ning ainult A260 abil määratud kontsentratsioon ei pruugi olla tegelik DNA või RNA.Kontsentratsiooni ning selle terviklikkuse ja lagunemise üle ei saa hinnata.

Kuidas siis hinnata meie puhastatud nukleiinhappe kvaliteeti?Lisaks mikro/ultramikro-UV-spektrofotomeetri kasutamisele tuvastamiseks on vaja ka selliseid meetodeid nagu agaroosgeelelektroforees, et visuaalselt kuvada nukleiinhappe puhtust ja terviklikkust ning näidata kontsentratsiooni teatud määral.Sel viisil on erinevate meetodite tuvastamistulemustest saadud nukleiinhapete saagis ja puhtus usutav.

Eksperimentaalse diagrammi võrdlus

H1299 rakkude genoomne DNA ekstraheeriti ettevõtte A DNA ekstraheerimiskomplektide abil ja täheldati olulist saastumist lisanditega, mille tulemuseks olid kõrged OD väärtused

(OD mõõteväärtus ja vastav elektroferogramm)

Hindamisindeks

Kas nukleiinhapete saagise ja kvaliteedi testimiseks on olemas "kuldstandard"?

Lihtsat, kiiret ja odavat meetodit meile teadaolevalt ei ole olemas.Olgu selleks spektrofotomeeter, geelelektroforees või massispektromeetria, need kõik peegeldavad nukleiinhappe kontsentratsiooni ja puhtust lahuses erinevatest aspektidest ning neid tuleb hinnata üksteisele viidates.

Parim hindamisindeks on alatieksperimentaalne järelrakendus.See ei mõjuta pöördtranskriptsiooni ja PCR amplifikatsiooni efektiivsust.Usaldusväärsete amplifikatsiooniproduktide ja Ct väärtuste saamine ning täieliku järjestuse saamine sekveneerimise teel on edukas nukleiinhappe ekstraheerimine.

Kokkuvõtteks võib öelda, et ainult suhtega teooria vaade peaks olema vaidlustatud vaatega "kasutada häid allavoolu eksperimentaalseid tulemusi heade ekstraheerimisparameetritena"!

Soovitatavad Foregene DNA RNA ekstraheerimiskomplektid kõrge DNA/RNA puhtuse saavutamiseks:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/