SOP-süsteemi ehitamine

Looge PCR-katse SOP, et standardida katsepersonali käitumist.

Eksperimendi läbiviijad järgivad rangelt tööprotseduure ja minimeerivad inimteguritest põhjustatud PCR-reostust või hoiavad ära reostuse tekkimise operatsiooni käigus.Lisaks peaksid katse läbiviija omama vastavaid erialaseid teadmisi ja oskusi, sealhulgas valdama seotud seadmeid, selgeks tegema kogu tööprotsessi, valdama saasteravi meetodeid ja laboratoorseid kvaliteedikontrolli meetodeid ning oskama õigesti tõlgendada katsetulemusi.

Standard PCR labori ehitus

PCR-labor on põhimõtteliselt jagatud neljaks valdkonnaks, nimelt reaktiivi ettevalmistamise ala, proovi töötlemise ala, amplifikatsiooniala ja amplifikatsiooniproduktide analüüsi ala.Esimesed kaks ala on võimenduseelsed alad ja kaks viimast ala on võimendusjärgsed alad.Eelvõimenduse tsoon ja järelvõimenduse tsoon peaksid olema rangelt eraldatud.Katsematerjalid, reaktiivid, salvestuspaber, pliiatsid, puhastusmaterjalid jne võivad voolata ainult eelvõimendusalast amplifikatsioonijärgsesse piirkonda, st reaktiivi ettevalmistusalast, proovi töötlemise piirkonnast, amplifikatsioonialast ja amplifikatsiooniprodukti analüüsipiirkonnast ning ei tohi voolata vastupidises suunas.Õhuvool laboris peaks samuti liikuma eelvõimenduse alalt võimendusjärgsesse piirkonda, mitte vastupidises suunas.

Vähendage katseetappe

Kui laboris tehakse ainult PCR tuvastamist ja tuvastamist, on tavapärase PCR asemel soovitatav kasutada fluorestsents-kvantitatiivset PCR-i.

Fluorestsents-kvantitatiivseid PCR tuvastamise tulemusi saab koguda ja analüüsida fluorestsentssignaalide abil, seega pole pärast reaktsiooni elektroforeesiks vaja kaant avada, mis väldib reaktsioonisaaduste lekkimisest põhjustatud PCR-produktide saastumist aerosoolide moodustumiseks.Kui suurendate geelelektroforeesi laadimisetapi ajal korkide avade arvu, tekib tõenäoliselt aerosoolsaaste.Soovitatav on propageerida kvantitatiivse PCR rakendamist ja kvalitatiivne PCR järk-järgult asendada.

Võtta vastu UNG saastetõrjesüsteem

PCR-reaktsiooniks kasutatakse UNG anti-PCR toote saastumise süsteemi.

Süsteem kasutab dTTP asemel dUTP-d.Pärast PCR reaktsiooni liidetakse kõik PCR produktid (DNA fragmendid) dUTP-ga;PCR reaktsiooni järgmises voorus inkubeeritakse süsteemi lisatud UNG ensüümi 37 °C juures 5 minutit enne PCR-i, mis võib olla spetsiifiline. Lagundada kõik dUTP-d sisaldavad DNA fragmendid ja seejärel viia läbi PCR reaktsioon.See võib täielikult eemaldada PCR-toodete põhjustatud aerosoolsaaste.Mõju on näidatud alloleval joonisel:

Märkus. Otsese PCR-seeria jaoks saate valida FJ Biotechi anti-PCR-toodete saastesüsteemi seeriatooted.

Soovita

Laborites, mis viivad läbi suuremahulisi genotüpiseerimistesti, on lisaks mõistlike laborite ehitamisele tungivalt soovitatav kasutada reaktiivide testimiseks ka UNG anti-PCR toodete saastumise süsteemi.

Meeldetuletus: selle süsteemi kasutamine ei saa eemaldada juba põhjustatud PCR-i toote saastumist.Seetõttu tuleks vastava testi alguses kasutada UNG-süsteemi ja PCR-i amplifikatsiooniks alati kasutada UNG-süsteemi, et vältida PCR-toodete saastumist.Valepositiivne.

Suuremahuliste katsete läbiviimisel on soovitatav kasutada Forge Biotechi Direct PCR-UNG süsteemi, näiteks: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Plant Seed Direct PCR komplekt-UNG；

Animal Tissue Direct PCR komplekt-UNG；

Mouse Tail Direct PCR komplekt-UNG；

Zebra Fish Direct PCR komplekt-UNG.

See Foregene komplektide seeria ei suuda mitte ainult kiiresti ja ulatuslikult tuvastada PCR-i, vaid ka tõhusalt ära hoida ja kontrollida PCR-i toote saastumist.