1: Vahetage katsetarvikud õigel ajal välja

Seadistage (NTC) negatiivne kontroll ja korrake seda mitu korda.Kui avastatakse, et laboris on PCR-toode saastunud, vahetage kõik katsevahendid õigeaegselt välja.Näiteks: uuesti lahjendada ja valmistada ette praimerid, uuesti steriliseerida pipetiots, EP toru, ddH2O jne, asendada uue pipetiga ja ajutiselt laenata teisi laboreid PCR katsete tegemiseks.Saastunud laboratooriumi ventileeritakse ja kiiritatakse ultraviolettkiirtega, kuni PCR-produkti saastumine on kõrvaldatud enne katsega jätkamist.

2: pikendage UV-kiirguse aega

Tasub teada, et DNA saastumise eemaldamiseks tuleks tavalist ultraviolettkiirgust pikendada tavapärasest 2 tunni võrra.Sellegipoolest ei ole UV-kiirguse mõju DNA saastumise väikeste fragmentide (alla 200 bp) eemaldamisele endiselt hea.

Ultraviolettkiirguse lainepikkus (nm) on üldiselt 254/300 nm ja sellest piisab 30 minutiks kiiritamiseks.Tuleb märkida, et UV-kiirguse valimisel PCR-i jääkproduktide saastumise kõrvaldamiseks tuleks arvestada PCR-produkti pikkust ja aluste jaotust produktide järjestuses.UV-kiirgus on efektiivne ainult pikkade fragmentide puhul, mille suurus on üle 500 aluspaari, ja sellel on väike mõju lühikestele fragmentidele.

UV-kiirguse ajal moodustavad PCR-produktis olevad pürimidiini alused dimeere.Need dimeerid võivad pikendamise lõpetada, kuid mitte kõik DNA ahela pürimidiinid ei saa moodustada dimeere ja UV-kiirgus võib samuti dimeere lõhkuda..Dimeeri moodustumise aste sõltub UV-lainepikkusest, pürimidiini dimeeri tüübist ja dimeerikohaga külgnevate nukleotiidide järjestusest.Seetõttu, kui PCR-iga amplifitseeritud fragmendid on väikesed, on soovitatav kasutada UNG anti-PCR toote saastesüsteemi.

3: Tavaliselt kasutatavad DNA-reostuse püüdjad

Pipettide lisamisel tekivad kergesti aerosoolid, mida on raske vältida, ja see settib kiiresti.Seetõttu on kahtlemata hea valik DNA-reostuse leviku tõkestamiseks sageli kasutada spetsiaalseid DNA saaste eemaldajaid.

4: Kasutage UNG reostusvastast süsteemi

Pärast PCR-i toote saastumise eemaldamist saab testimislabor kasutada PCR-i toote saastumise vältimiseks UNG anti-PCR-i toote saastumise süsteemi.Üldlaborites saate teha lihtsaid eksperimentaalseid jaotusi, eraldada rangelt PCR-i tooteala teistest piirkondadest, kehtestada teatud laborireeglid ja -eeskirjad ning viia läbi asjakohaseid koolitusi, et vältida PCR-i toote saastumist.

Soovitused: mõistliku PCR-labori loomine, hea PCR-keskkonna säilitamine, standardsete PCR-i tööprotseduuride koostamine ja katsetajate range tegutsemisalase teadlikkuse kasvatamine on PCR-katsete saaste vältimise või vähendamise võtmed.