• facebook
  • linkedin
  • Youtube

Bukaaltampooni/FTA kaardi DNA ekstraheerimise komplekt

Järgmine võimalike probleemide analüüsBukaalnetampoon/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

Puhastuskolonn on ummistunud

 

 

Selles komplektis adsorbeeritakse genoomse DNA ekstraheerimise käigus puhastuskolonn otse proovi ensümaatilise lüüsi segule ilma tsentrifuugimiseta ning puhastuskolonn võib olla blokeeritud mittetäieliku ensümiseerimise ja proovi kõrge viskoossuse tõttu.

Järgmised võimalikud põhjused on järgmised:

1. Koeproovide mittetäielik ensümaatiline seedimine.

Soovitus: Foregene Protease proovi töötlemise aega saab sobivalt pikendada või supernatanti võtta pärast tsentrifuugimist kiirusel 12 000 p/min (~13 400).× g) 5 minutit.

2. Koeproovide või suurte kudede liigne kasutamine.

Soovitus: parem on mitte ületada 1Bukaalne tampoon proovis;kui proov on liiga suur, suurendage vastavalt puhvri ST1, Foregene Protease ja puhvri ST2 annust.

3. Proovi viskoossus on liiga kõrge.

Soovitus: Enne genoomse DNA ekstraheerimist võib proove sobivalt lahjendada 10 mM Tris-HCl-ga.

4. Verekaardi killud on imetud.

Soovitus. Veretäpi (FTA Card) genoomse ekstraheerimise etapi 6 mööduvat tsentrifuugimise aega saab vastavalt pikendada.

 

Madal saagikus või puudub DNA

 

Genoomse DNA saagist mõjutavad sageli mitmesugused tegurid, sealhulgas proovi päritolu, proovi säilitamise tingimused, proovi ettevalmistamine, manipuleerimine jne.

Ekstraheerimise käigus ei saa genoomset DNA-d saada

Võimalikud põhjused on järgmised:

1. Proovide ebaõige säilitamine või liiga pikk säilitamine viib genoomse DNA lagunemiseni.

Soovitus: Suust võetud tampooniproovid tuleks eelistatavalt võtta värskelt ning konserveeritud tampooniproovide kasutamine genoomse DNA ekstraheerimiseks ei ole soovitatav;veretäppproovid peaksid tagama, et kvaliteet on kvalifitseeritud ja säilitusaeg ei tohiks olla liiga pikk.

2. Liiga vähese koe kasutamise tulemusena ei pruugita vastavat genoomset DNA-d ekstraheerida.

Soovitus: järgigebuccal tampooniproovide võtmise juhised kasutusjuhendis ja pühkige nii palju kordi kui võimalik, et suukaudsele tampoonile saaks genoomse DNA ekstraheerimiseks piisavalt rakke kinnitada;verelaikude proovide võtmiseks saab veretäpi lõikamisala vastavalt suurendada.

3. Foregene Protease on valesti säilinud, mille tulemuseks on selle aktiivsuse vähenemine või inaktiveerimine.

Soovitus: Kinnitage säilitustingimusedFOregene Protease või asendage see ensümaatilise reaktsiooni jaoks uue Foregene Protease'ga.

4. Komplekti ebaõige säilitamine või säilitusaeg on liiga pikk, mille tulemuseks on mõne komplekti komponendi rike.

Soovitus: ostke uusBukaalne tampooni DNAisolatsioon komplekt seotud protseduuride jaoks.

5. Puhver WB ei lisa absoluutset etanooli.

Soovitus: veenduge, et puhver WB lisab õige koguse absoluutset etanooli.

6. Eluenti ei ole silikoonkilele õigesti lisatud.

Soovitus: lisada 65°CEelsoojendatud eluent langeb silikoonmembraani keskele ja jäetakse elueerimise efektiivsuse suurendamiseks 5 minutiks toatemperatuurile.

Low-yeld genoomne DNA isoleeritud

Järgmised võimalikud põhjused on järgmised:

1. Proovide ebaõige säilitamine või liiga pikk säilitamine viib genoomse DNA lagunemiseni.

Soovitus: Suust võetud tampooniproovid võetakse eelistatavalt värskelt ja konserveeritud tampooniproove ei tohiks kasutada genoomse DNA ekstraheerimiseks.

2. Kui koeproovi kogus on liiga väike, on eraldatud genoomse DNA sisaldus väiksem.

Soovitus: järgige kasutusjuhendis olevaid suust võetud tampooniproovide võtmise juhiseid, pühkige nii palju kordi kui võimalik, et suukaudsele tampoonile saaks genoomse DNA ekstraheerimiseks kinnitada piisavalt rakke.

3. Foregene Protease on valesti säilinud, mille tulemuseks on selle aktiivsuse vähenemine või inaktiveerimine.

Soovitus: Kinnitage säilitustingimusedthe Foregen Protease või asendage see uuega Foregene proteaas ensümaatiliseks reaktsiooniks.

4. Eluendi probleemid.

Soovitus: Elueerimiseks kasutage puhvrit EB;kui kasutate ddH2O või muud eluendid, kinnitage, et eluaadi pH on vahemikus 7,0-8,5.

5. Eluaati ei ole õigesti tilkhaaval lisatud.

Soovitus: lisage eluenditilgad silikoonmembraani keskele ja jätke elueerimise efektiivsuse suurendamiseks 5 minutiks toatemperatuurile.

6. Elueerimisvedelikku koguneb liiga vähe.

Soovitus: kasutage genoomse DNA elueerimiseks vähemalt juhendis nõutud eluentimitte vähem kui 15μl.

Loh puhtus of genoomne DNAisoleeritud

Madal genoomse DNA puhtus võib põhjustada allavoolu katsete ebaõnnestumist või ebarahuldavaid tulemusi, näiteks: ensüüme ei saa lahti lõigata, PCR ei saa huvipakkuvat geenifragmenti jne.

Võimalikud põhjused on järgmised:

1. Heteroproteiini saaste, RNA saaste.

Analüüs: Puhastuskolonni ei pestud puhvriga PW;puhver-PW pesupuhastuskolonni ei pestud õiget tsentrifugaalkiirust kasutades.

Soovitus: enne etanooli lisamist veenduge, et supernatandis poleks sadet;peske puhastuskolonni kindlasti vastavalt juhistele ja seda sammu ei saa vahele jätta.

2. Lisandite ioonireostus.

Analüüs: Puhvri WB pesupuhastuskolonn jäeti välja või pesti ainult üks kord, mille tulemuseks oli jääk-ioonne saastumine.

Soovitus: peske puhvrit WB 2 korda vastavalt juhistele, et eemaldada võimalikult palju jääkioonid.

3. RNA ensüümi saastumine.

Analüüs: puhvrisse lisati võõr-RNaasid;Puhvri PW pesuoperatsioon oli vale, mille tulemuseks olid RNaasi jäägid, mis mõjutasid allavoolu RNA eksperimentaalseid operatsioone, näiteks in vitro transkriptsiooni.

Soovitus: Foregene seeria nukleiinhapeisolakomplektid võivad eemaldada RNA ilma täiendava RNaasi lisamiseta,seega bukaalne tampooni/FTA kaardi DNA isolatsioonikomplektneedn't lisada RNaasi;järgige kindlasti Puffer PW pesupuhastuskolonni juhiseid ja seda sammu ei saa vahele jätta.

4. Etanooli jääk.

Analüüs: Puhver WB ei teostanud pärast puhastuskolonni pesemist tühja toru tsentrifuugimist.

Soovitus: viige läbi õige tühja katsuti tsentrifuugimine vastavalt juhistele.

5. Muu lisandireostus.

Analüüs: salvestatud proove või eriproove ei töödelda.

Soovitus: eeltöötlege proovi põhjalikult vastavalt juhistele.

 


Postitamise aeg: 18. märts 2022