KKK on mõeldudAnimal Total RNA isolation kit

Järgmine analüüs probleemidest, millega võite kokku puutudaloomsete kudede/rakkude RNA ekstraheerimine will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA-d ei ekstraheerita või RNA saagis on madal

Taastumise efektiivsust mõjutavad sageli mitmesugused tegurid, näiteks: koeproovi RNA sisaldus, töömeetod, elueerimismaht jne.

1. Töötamise ajal viidi läbi jäävannis või krüogeenne (4 °C) tsentrifuugimine.

Soovitus: Töötage kogu protsessi vältel toatemperatuuril (15-25 °C), ärge jäävannis ega tsentrifuugige madalal temperatuuril.

2. Proovide ebaõige säilitamine või liiga pikk säilitusaeg.

Soovitus: hoida proove temperatuuril -80 °C või külmutada vedelas lämmastikus ja vältida korduvat külmutamist-sulatamist;proovige RNA ekstraheerimiseks kasutada värskeid kudesid või kultiveeritud rakke.

3. Ebapiisav proovi lüüs.

Soovitus: koe homogeniseerimisel veenduge, et kude oleks piisavalt homogeniseeritud ja et koerakud oleksid piisavalt lõhenenud, et selgitada RNA vabanemist.

4. Eluenti pole õigesti lisatud.

Soovitus: veenduge, et RNaasivaba ddH₂Puhastuskolonni membraani keskele lisatakse tilkhaaval O.

5. Puhvrisse RL2 või puhvrisse RW2 ei lisatud õiget kogust absoluutset etanooli.

Soovitus: järgige juhiseid, lisage puhvrisse RL2 ja puhvrisse RW2 õige kogus absoluutset etanooli ning segage enne komplekti kasutamist korralikult läbi.

6. Koeproovi annus ei ole sobiv.

Soovitus: kasutage 10–20 mg kude või (1–5) × 10⁶rakke 500 μl puhvri RL1 kohta, kuna koe liigne kasutamine võib vähendada RNA ekstraheerimist.

7. Vale elueerimismaht või mittetäielik elueerimine.

Soovitus: Puhastuskolonni elueerimismaht on 50-200 μl;kui elueerimisefekt ei ole rahuldav, on soovitatav pikendada toatemperatuuril asetamise aega pärast eelsoojendatud RNaasivaba ddH lisamist₂O, nt 5-10 min.

8. Puhastuskolonnis on pärast puhvri RW2 pesemist etanoolijääk.

Soovitus: Kui pärast puhvri RW2 pesemist, tühja katsuti tsentrifuugimist 1 minuti jooksul on etanoolijääke, võib tühja katseklaasi tsentrifuugimise aega pikendada 2 minutini või asetada puhastuskolonni 5 minutiks toatemperatuurile, et jääk-etanooli adekvaatselt eemaldada.

Puhastatud RNA laguneb

Puhastatud RNA kvaliteet on seotud selliste teguritega nagu proovi säilivus, RNaasi saastumine ja manipuleerimine jne.

1. Koeproove ei hoita õigel ajal.

Soovitus: Kui koeproove või rakke ei kasutata õigeaegselt pärast kogumist, külmutada kohe -80 °C või vedela lämmastiku juures.RNA eraldamiseks kasutage võimalusel äsja võetud koe- või rakuproovi.

2. Koeproovide korduv külmutamine-sulatamine.

Soovitus: koeproovide säilitamisel on parem lõigata need säilitamiseks väikesteks tükkideks ja nende kasutamisel eemaldada üks tükk, et vältida proovi korduvat külmutamist-sulatamist ja RNA lagunemist.

3. RNaasi sisestatakse või ei kanta operatsiooni ajal ühekordseid kindaid, maske vms.

Soovitus: RNA ekstraheerimise katseid on kõige parem teha eraldi RNA manipuleerimisruumides ja laud puhastatakse enne katset.

Katse ajal kandke ühekordselt kasutatavaid kindaid ja maske, et minimeerida RNaasi sissetoomisest põhjustatud RNA lagunemist.

4. Reaktiivid on kasutamise ajal saastunud RNaasiga.

Soovitus: Asendage seotud katsete jaoks uue loomade kogu RNA isolatsioonikomplektiga.

5. RNA manipuleerimisel kasutatavad tsentrifuugitorud, otsikud jne on saastunud RNaasiga.

Soovitus: veenduge, et RNA ekstraheerimiseks kasutatavad tsentrifuugitorud, otsikud, pipetid jne on kõik RNaasivabad.

Puhastatud saadud RNA mõjutab allavoolu katseid

Puhastuskolonnis puhastatud RNA, kui soolaioonid, valgusisaldus on liiga suur, mõjutab allavoolu katset, näiteks: pöördtranskriptsioon, Northern Blot et al.

1. Elueeritud RNA-s on soolaioonide jääke.

Soovitus: veenduge, et puhvrile RW2 on lisatud õige kogus etanooli, ja tehke 2 puhastuskolonni pesu tööks näidatud tsentrifugaalkiirusel;soolaioonide jääkide korral jätke puhastuskolonn 5 minutiks toatemperatuuril puhvrisse RW2 ja tsentrifuugige, et maksimeerida soolasaaste eemaldamist.

2. Etanooli jääk elueeritud RNA-s.

Soovitus: veenduge, et pärast puhvri RW2 pesemist teostage tühja katsuti tsentrifuugimine tööks näidatud tsentrifuugimiskiirusel, suurendage tühja katsuti tsentrifuugimise aega 2 minutini, kui etanoolijääke on veel, või jätke see pärast tühja katsuti tsentrifuugimist 5 minutiks toatemperatuurile, et maksimeerida etanoolijääkide eemaldamist.

Nultseiinhappe proovitüüpide eraldamine

Foregene RNA isolatsioonikomplektid võivad saada RNA täielikku isoleerimist/ekstraheerimist järgmistest proovikastidest: loomsed kuded, taim, rakud, viirused, veri jne.

Kuidas komplekti hoida

Säilitamine toatemperatuuril 24 kuud.