Sissejuhatus:

RNA, teaduslik nimetus ribonukleiinhape, selle lühend pärineb sõnast RiboNucleic Acid, on teatud tüüpi nukleiinhape, mis moodustub vähemalt kümnete ribonukleotiidide ühendamisel fosfodiestersidemete kaudu.

RNA uurimise eelduseks on saastevaba kogu-RNA ekstraheerimine ja RNA ekstraheerimise põhiprintsiibi võib kokku võtta järgmiselt:

1. Kõigepealt purustage rakud

2. Seejärel eemaldage makromolekulaarsed lisandid (valgud, lipiidid, DNA jne).

3. Lõpuks sadestatakse RNA soolade ja orgaaniliste lahustite eemaldamisel ning RNA edasisel puhastamisel.

Ekstraheerimismeetodi minevik ja olevik

Esimese põlvkonna RNA ekstraheerimismeetod on vanaisa Piotr Chomczynski ja vanaema Nicoletta Sacchi väljamõeldud TRIzol sadestamismeetod (kasutatud reaktiivide hulka kuuluvad guanidiini isotiotsüanaat, fenool, kloroform jne), sest see leiutis võimaldab RNA ekstraheerimist Kiiresti ja lihtsalt, sellest ajast sai alguse RNA uurimise tõus.

Hiljem müüs vanaisa selle patendi Invitrogenile ja Invitrogen propageeris seda meetodit maailmas ja sai laialdaselt kasutatavaks meetodiks.

Hiljem ostis Invitrogeni Thermo!

Tüüpiline toode: Invitrogeni TRIzol reaktiiv

TRIzoli sadestamismeetod nõuab aga RNA mitmekordset sadestamist ja ekstraheerimist ning kasutatavad reagendid on mürgised ja nende toimimine võtab kaua aega.

Seetõttu hakati kasutama teise põlvkonna kolonn-ensüümi puhastamise meetodit, kasutades silikageeli membraani spetsiifilise nukleiinhappe adsorptsioonimaterjalina, et maksimeerida RNA taastumist proovis, eemaldades samal ajal muud lisandid.

Teise põlvkonna meetod lihtsustab toimingut stabiilse jõudluse alusel, vähendab riskitegurit ja parandab RNA ekstraheerimise efektiivsust.

Esinduslikud tooted: QIAGEN RNeasy ja enamik kodumaiseid tooteid

Kuid nii esimese kui ka teise põlvkonna meetodid nõuavad DNA saastumise eemaldamiseks DNaasi kasutamist, mis toob järgnevatele allavoolu katsetele kaasa ebamugavusi.Jääk-DNaas vähendab pöördtranskriptsiooni efektiivsust ja esimese ahela cDNA sünteesi, mõjutades seeläbi tulemuste täpsust.

Seetõttu optimeeritakse kolmanda põlvkonna ekstraheerimismeetod teise põlvkonna põhjal.Katse ei vaja ensüümide lisamist ja RNA-d on lihtne saada ainult kahe veeru abil.

1. veerg: DNA puhastamise kolonn DNA puhastamiseks

2. veerg: ainult RNA-d Veerg adsorbeerib ja taastab spetsiifiliselt RNA

Selline lihtne toiming mitte ainult ei säästa aega, vaid hõlbustab ka allavoolu katsete toimimist!

Esindustooted: QIAGEN RNeasy Plus jaForegeneRNA puhastussarja tooted

(RNeasy Plus)

(Foregene'i omaPlant Total RNA isolation Kit）

Ütle vaikselt!Foregene RNA komplektis on ka ülilihtsalt kasutatav RNaasi kustutuskumm, mis suudab 1 minutiga täielikult eemaldada tahkelt pinnalt 400μg RNaasi, lisamata inimkehale toksilisi aineid!

Pilt1: tööprotsesside võrdlustabel

Foregene tooted suudavad RNA ekstraheerimise lõpule viia vaid kahe looga, ärge muutke teisi oma katse edenemise pärast kadedaks!

Pilt2:Ekatsetulemused võrdlustabel

Esimene põlvkond (1: TRIzol)

Teine põlvkond (2: QIAGENi RNeasy)

Kolmas põlvkond (3: QIAGENi RNeasy plus, 4: Foregene)

Pilt3: qPCR graafik (amplifikatsioonikõvera graafik)

Esimene põlvkond (roheline tähendab TRIzol -, punane tähendab TRIzol +)

Teine põlvkond (taevasinine tähendab QIAGEN RNeasy-, punane tähendab QIAGEN RNeasy +)

Kolmas põlvkond (sinine tähendab QIAGEN RNeasy plus, roheline Foregene)

(Märkus: qPCR graafik "-" näitab, et DNaasi pole lisatud ja DNA saastet pole eemaldatud. Seetõttu on CT kõrgem ja tulemus ei ole täpne; "+" näitab, et DNaas on lisatud ja DNA saastumine eemaldatud, tulemus on täpne)

Iga tehniline uuendus tähendab, et eksperimendi toimimine areneb lihtsamas ja kasutajasõbralikumas suunas.

Foregene eesmärk on aidata rohkematel teadlastel säästa eksperimenteerimise aega ja kulusid, saada kvaliteetseid katsetulemusi ning luua ühiselt väärtuslikumaid teadussaavutusi.