Antikehad, mida nimetatakse ka immunoglobuliinideks (Ig), on glükoproteiinid, mis seonduvad spetsiifiliselt antigeenidega.
 
Tavapärast antikehapreparaati toodetakse loomade immuniseerimise ja antiseerumi kogumise teel.Seetõttu sisaldab antiseerum tavaliselt antikehi teiste mitteseotud antigeenide ja teiste seerumi valgukomponentide vastu.Üldised antigeenimolekulid sisaldavad enamasti mitut erinevat epitoopi, seega on tavapärased antikehad ka mitme erineva epitoobi vastaste antikehade segu.Isegi tavalised sama epitoobi vastu suunatud seerumi antikehad koosnevad ikka veel heterogeensetest antikehadest, mida toodavad erinevad B-raku kloonid.Seetõttu nimetatakse tavalisi seerumi antikehi ka polüklonaalseteks antikehadeks või lühidalt polüklonaalseteks antikehadeks.
 
Monoklonaalne antikeha (monoklonaalne antikeha) on ühe B-raku klooni poolt toodetud väga ühtlane antikeha, mis on suunatud ainult konkreetse epitoobi vastu.Tavaliselt valmistatakse seda hübridoomitehnoloogia abil – hübridoomi antikehade tehnoloogia põhineb rakkude liitmise tehnoloogial, mis ühendab B-rakud võimega eritada spetsiifilisi antikehi ja lõpmatu kasvuvõimega müeloomirakke B-raku hübridoomideks.Sellel hübridoomirakul on algraku omadused.See võib in vitro vohada lõputult ja surematult nagu müeloomirakud ning sünteesida ja eritada spetsiifilisi antikehi, nagu põrna lümfotsüüdid.Kloonimise teel võib saada ühest hübridoomirakust tuletatud monoklonaalse liini, st hübridoomi rakuliini.Selle toodetavad antikehad on väga homogeensed antikehad sama antigeense determinandi, st monoklonaalsete antikehade vastu.
 
Antikehad eksisteerivad ühe või mitme Y-kujulise monomeerina (st monoklonaalsed antikehad või polüklonaalsed antikehad).Iga Y-kujuline monomeer koosneb 4 polüpeptiidahelast, sealhulgas kahest identsest raskest ahelast ja kahest identsest kergest ahelast.Kerge ja raske ahel on nimetatud nende molekulmassi järgi.Y-kujulise struktuuri ülaosa on varieeruv piirkond, mis on antigeeni sidumissait.(väljavõte Detai bio-monoklonaalsete antikehade kontseptsioonist)
 
Antikehade struktuur
Raske kett
Imetajate Ig raskeid ahelaid on viit tüüpi, mida nimetatakse kreeka tähtedega α, δ, ε, γ ja μ.Vastavaid antikehi nimetatakse IgA, IgD, IgE, IgG ja IgM.Erinevad rasked ahelad erinevad suuruse ja koostise poolest.α ja γ sisaldavad ligikaudu 450 aminohapet, samas kui μ ja ε sisaldavad ligikaudu 550 aminohapet.
Igal raskel ahelal on kaks piirkonda: konstantne piirkond ja muutuv piirkond.Kõigil sama tüüpi antikehadel on sama konstantne piirkond, kuid erinevat tüüpi antikehade vahel on erinevusi.Raskete ahelate γ, α ja δ konstantsed piirkonnad koosnevad kolmest paralleelsest Ig domeenist koos liigendpiirkonnaga, et suurendada selle paindlikkust;raskete ahelate μ ja ε konstantsed piirkonnad koosnevad 4 Ig domeenist.Erinevate B-rakkude poolt toodetud antikeha raske ahela varieeruv piirkond on erinev, kuid sama B-raku või rakuklooni poolt toodetud antikeha varieeruv piirkond on sama ja iga raske ahela varieeruv piirkond on umbes 110 aminohappe pikkune., Ja moodustavad ühe Ig domeeni.
 
Valguskett
Imetajatel on ainult kahte tüüpi kergeid ahelaid: lambda tüüpi ja kappa tüüpi.Igal kergel ahelal on kaks seotud domeeni: konstantne piirkond ja varieeruv piirkond.Kerge ahela pikkus on umbes 211-217 aminohapet.Igas antikehas sisalduvad kaks kerget ahelat on alati samad.Imetajate puhul on iga antikeha kergel ahelal ainult üks tüüp: kappa või lambda.Mõnedel madalamatel selgroogsetel, nagu kõhrekalad (kõhrekalad) ja luukalad, leidub ka teist tüüpi kergeid ahelaid, näiteks ioota (iota) tüüpi.
 
Fab ja Fc segmendid
Fc segmenti saab antikehade märgistamiseks otse kombineerida ensüümide või fluorestseeruvate värvainetega.See on osa, kus antikeha neetub ELISA protsessi käigus plaadile, ja see on ka osa, kus teine ​​antikeha tuvastatakse ja seotakse immunosadestamise, immunoblotimise ja immunohistokeemiaga.Antikehi saab hüdrolüüsida kaheks F(ab) segmendiks ja üheks Fc segmendiks proteolüütiliste ensüümide, nagu papaiin, toimel või need saab liigendpiirkonnast lahti murda pepsiini abil ja hüdrolüüsida üheks F(ab)2 segmendiks ja üheks Fc segmendiks.IgG antikehade fragmendid on mõnikord väga kasulikud.Fc segmendi puudumise tõttu ei sadestu F(ab) segment koos antigeeniga ega jää seda in vivo uuringutes kinni ka immuunrakkude poolt.Väikeste molekulaarsete fragmentide ja ristsiduva funktsiooni puudumise tõttu (Fc segmendi puudumise tõttu) kasutatakse Fab segmenti tavaliselt funktsionaalsetes uuringutes radiomärgistamiseks ja Fc segmenti kasutatakse peamiselt blokeeriva ainena histokeemilises värvimises.
 
Muutuvad ja konstantsed piirkonnad
Muutuv piirkond (V-piirkond) asub H-ahela 1/5 või 1/4 (sisaldab umbes 118 aminohappejääki) N-otsa lähedal ja 1/2 (sisaldab umbes 108-111 aminohappejääki) L-ahela N-otsa lähedal.Igal V-piirkonnal on peptiidtsükkel, mis on moodustatud ahelasiseste disulfiidsidemetega, ja iga peptiidtsükkel sisaldab ligikaudu 67 kuni 75 aminohappejääki.Aminohapete koostis ja paigutus V piirkonnas määravad antikeha antigeeni sidumise spetsiifilisuse.Tänu V-piirkonna aminohapete pidevalt muutuvatele tüüpidele ja järjestusele võib moodustuda mitmesuguseid antigeenide erineva spetsiifilisusega antikehi.L-ahela ja H-ahela V-piirkondi nimetatakse vastavalt VL-ks ja VH-ks.VL ja VH puhul on mõne kohaliku piirkonna aminohappeline koostis ja järjestus suurem varieeruvuse aste.Neid piirkondi nimetatakse hüpervarieeruvateks piirkondadeks (HVR).Aminohappeline koostis ja mitte-HVR osade paigutus V piirkonnas on suhteliselt konservatiivne, mida nimetatakse raamistiku piirkonnaks.VL-s on kolm hüpervarieeruvat piirkonda, mis tavaliselt paiknevad vastavalt aminohappejääkide 24 kuni 34 ja 89 kuni 97 juures.VL ja VH kolme HVR-i nimetatakse vastavalt HVR1, HVR2 ja HVR3.Röntgenkristallide difraktsiooni uurimine ja analüüs tõestas, et hüpervarieeruv piirkond on tõepoolest koht, kus antikeha antigeen seondub, mistõttu seda nimetatakse komplementaarsust määravaks piirkonnaks (CDR).VL ja VH HVR1, HVR2 ja HVR3 võib nimetada vastavalt CDR1, CDR2 ja CDR3.Üldiselt on CDR3 hüpervarieeruvus suurem.Hüpervarieeruv piirkond on ka peamine koht, kus eksisteerivad Ig molekulide idiotüüpsed determinandid.Enamikul juhtudel mängib H-ahel antigeeniga seondumisel olulisemat rolli.
Konstantne piirkond (C-piirkond)asub H-ahela 3/4 või 4/5 (ligikaudu aminohappest 119 kuni C-otsani) C-otsa lähedal ja 1/2 (sisaldab ligikaudu 105 aminohappejääki) L-ahela C-otsa lähedal.Iga H-ahela funktsionaalne piirkond sisaldab umbes 110 aminohappejääki ja peptiidtsüklit, mis koosneb 50–60 aminohappejäägist, mis on ühendatud disulfiidsidemetega.Selle piirkonna aminohappeline koostis ja paigutus on samas looma Ig isotüübi L ahelas ja sama tüüpi H ahelas suhteliselt konstantsed.Sama, see saab ainult spetsiifiliselt seonduda vastava antigeeniga, kuid selle C-piirkonna struktuur on sama, see tähendab, et sellel on sama antigeensus.Hobuse anti-inimese IgG sekundaarset antikeha (või anti-antikeha) saab kombineerida kahega. Tekib erinevate eksotoksiinide vastaste antikehade (IgG) kombinatsioon.See on oluline alus sekundaarsete antikehade valmistamiseks ning fluorestseiini, isotoopide, ensüümide ja muude märgistatud antikehade kasutamisel.
 
 
Seotud tooted:
Cell Direct RT-qPCR komplekt